藥物分析

1、基本要求,一、掌握吡啶類、吩噻嗪類、苯并二氮雜卓類藥物的鑒別和含量測(cè)定的基本原理與方法。 二、熟悉本類藥物中典型藥物國外藥典收載的鑒別和含量測(cè)定方法。,返 回,第一節(jié) 吡啶類藥物,一、典型藥物的結(jié)構(gòu)與主要化學(xué)性質(zhì) （一）典型藥物的結(jié)構(gòu),,?,?,?,?,?,吡啶（pyridine）,,異煙肼（isoniazid）,,尼可剎米（nikethamide）,硝苯地平（nifedipine),（二）主要化學(xué)性質(zhì) 1、弱堿性 吡啶環(huán)上

2、的氮為堿性氮原子，吡啶環(huán)的pKb 值為8.8（水中）。尼可剎米除了吡啶環(huán) 上氮外，β位上被酰氨基取代。酰氨基化 學(xué)性質(zhì)不甚活潑，但遇堿水解后釋放出具 有堿性的二乙胺，故可以進(jìn)行鑒別。,2、還原性 異煙肼的吡啶環(huán)γ位上被具有還原性 酰肼取代，可被氧化劑氧化，可與含羰基的化合 物發(fā)生縮合反應(yīng)。

3、 3、吡啶環(huán)的特性 異煙肼和尼可剎米的吡啶環(huán) α、α’位未取代，而β或γ位被羧基衍生物所 取代，其吡啶環(huán)可發(fā)生開環(huán)反應(yīng)。（戊烯二醛反應(yīng)）,二、鑒別試驗(yàn),（一）吡啶環(huán)的開環(huán)反應(yīng) 本反應(yīng)適用于吡啶環(huán)的α、α’位無取代基的異 煙肼和尼可剎米。,1. 戊烯二醛反應(yīng)（köning 反應(yīng)）,尼可剎米 + 溴化氰,,H2O,戊烯二醛衍生物,,苯胺,黃色,,,（黃色~黃棕色）,（二）酰肼基團(tuán)的反應(yīng),1．還原反應(yīng),異煙

4、肼+AgNO3,,異煙酸銀,,+,N2,,+,Ag,( 白色）,銀鏡,異煙肼+亞硒酸,,硒,,（紅色）,2．縮合反應(yīng) 異煙肼的酰肼基與芳醛縮合形成腙，其有固定的熔點(diǎn)，可用以鑒別。ChP和BP均采用本法鑒別.,,黃色結(jié)晶 mp為228℃～231℃,（三）分解產(chǎn)物的反應(yīng),,使?jié)駶櫟募t色石蕊試紙變藍(lán),尼可剎米+NaOH,,?,二乙胺,,（一）異煙肼中游離肼的檢查 1. TLC法 Ch.P中異煙肼及其注射,采用TLC法中雜

5、質(zhì)對(duì)照法。 對(duì)照品：硫酸肼0.20mg/ml（相當(dāng)于游離肼50μg） 薄層板：硅膠（用羧甲基纖維素鈉溶液制備） 展開劑：異丙醇-丙酮（3 ：2） 顯色劑：乙醇制對(duì)-二甲氨基苯甲醛試液 檢測(cè)結(jié)果：供試品主斑點(diǎn)前方，不得顯黃色斑點(diǎn),三、有關(guān)物質(zhì)檢查,(二) 尼可剎米中有關(guān)雜質(zhì)檢查 因有關(guān)雜質(zhì)的化學(xué)結(jié)構(gòu)不

6、明，故Ch.p采用TLC法中的高低濃度對(duì)比法進(jìn)行檢查。,(三) 硝苯地平中有關(guān)物質(zhì)檢查 硝苯地平遇光分子內(nèi)部發(fā)生光化學(xué)歧化作用，降解為4-（2-硝基苯基）-2, 6-二甲基吡啶-3, 5-二羧酸二甲酯（A）和4-（2-亞硝基苯基）-2, 6-二甲基吡啶-3, 5-二羧酸二甲酯（B）。其化學(xué)結(jié)構(gòu)如下:,第二節(jié) 吩噻嗪類藥物,一、基本結(jié)構(gòu)與化學(xué)性質(zhì)（一）結(jié)構(gòu)特點(diǎn)與典型藥物,,,,,奮乃靜,,癸氟奮乃靜,,鹽酸氟奮乃靜,,

7、鹽酸三氟拉嗪,（二）主要化學(xué)性質(zhì) 1.紫外和紅外吸收光譜特征 硫氮雜蒽母核為共軛三環(huán)л系統(tǒng) 三個(gè)最大吸收峰別在：205nm、254nm、300nm 由于2位、10位上的取代基不同，可引起最大吸收峰的位移。 硫氮雜蒽母核的硫?yàn)槎r(jià)，易氧化為砜和亞砜，其紫外吸 收光譜有明顯不同，它們具有四個(gè)峰值。 另外，取代基R和R’的不同，則可產(chǎn)生不同的紅外光譜,2.易氧化呈色 二價(jià)硫易氧化，遇

8、不同氧化劑如硫酸、硝酸、三氯化鐵試液及過氧化氫等，隨著取代基的不同，而呈不同的顏色。 3.與金屬離子絡(luò)合呈色 本類藥物中未被氧化的硫，可與鈀離子形成配位化合物，其氧化產(chǎn)物則無此反應(yīng)。此性質(zhì)可用于鑒別和含量測(cè)定，并具有專屬性，可消除氧化產(chǎn)物的干擾。,（一）紫外特征吸收和紅外吸收光譜 本類藥物可用UV和IR鑒別，Ch.P中UV鑒別實(shí)例如下： 藥物名稱 溶 劑 濃度（μg/ml） λ

9、max（nm） A E1%1cm鹽酸氯丙嗪 鹽酸（9 →1000） 5 254 0.46 915 306 — —鹽酸異丙嗪 鹽酸（0.01mol/L） 6 249 — 883~937奮乃靜 無

10、水乙醇 7 258 0.65 —癸氟奮乃靜 乙醇 10 260 — —鹽酸氟奮乃靜 鹽酸（9 →1000） 10 255 — 553~593 鹽酸三氟拉嗪 鹽酸（1 →20） 10 256 — 630鹽酸

11、硫利達(dá)嗪 乙醇 8 264與315 — —,二、鑒別試驗(yàn),（二）顯色反應(yīng) 1. 與氧化劑的顯色反應(yīng) 藥物名稱 硫 酸 硝 酸 過氧化氫 鹽酸氯丙嗪 顯紅色, 漸變淡黃色 — 鹽酸異丙嗪 顯櫻桃紅色,放置 生成紅

12、色沉淀,加熱即溶解, 后顏色漸變深 溶液由紅色轉(zhuǎn)變?yōu)槌赛S色 奮乃靜 — — 顯深紅色;放置后 紅色漸褪去 鹽酸氟奮乃靜 顯淡紅色, 溫?zé)?—

13、 — 后變成紅褐色 鹽酸三氟拉嗪 — 生成微帶紅色的白色沉淀; 放 — 置后, 紅色變深, 加熱后變黃色 鹽酸硫利達(dá)嗪 顯藍(lán)色 — —,2. 與鈀離子絡(luò)合顯色反應(yīng) 利用分子

14、結(jié)構(gòu)中未被氧化的硫與金屬鈀離子絡(luò)合形成有色絡(luò) 合物，如與癸氟奮乃靜形成紅色絡(luò)合物。,,鹽酸異丙嗪中特殊雜質(zhì)檢查 主要有：2-二甲氨基-1-丙醇；N,N,β-三甲基-10H-吩噻嗪- 10-乙胺異構(gòu)體和結(jié)構(gòu)不清的分解產(chǎn)物 。因此采用TLC法中的 高低濃度對(duì)比法控制上述這些雜質(zhì)的限量。,三、特殊雜質(zhì)檢查,返 回,第三節(jié) 苯并二氮雜卓類藥物,一、結(jié)構(gòu)特征與典型藥物,地西泮,,阿普唑侖,,奧沙西泮,氯氮卓,,(一) 化學(xué)鑒

15、別試驗(yàn) 1。沉淀反應(yīng) 氯氮卓 橙紅色沉淀 阿普唑侖 鹽酸氟西泮 ＋ KBiI4 也生成橙紅色沉淀 氯硝西泮 放置后，沉淀顏色變深， 因此可以相互區(qū)別。,,,,,,二、鑒別試驗(yàn),阿普唑侖 + 遇硅鎢酸 白色沉淀，藥典中也用于鑒

16、別。,,2.水解后呈芳伯胺反應(yīng) 氯氮卓和奧沙西泮，其反應(yīng)如下：,3. 硫酸-熒光反應(yīng) 本類藥物溶于硫酸后，在紫外光（365nm）下，顯不同顏色的熒光。例如：,地西泮 黃綠色 黃色 氯氮卓 黃色 紫色 艾司唑侖 + H2SO4 亮綠色 + 稀硫酸 天藍(lán)色 硝西泮

17、 淡藍(lán)色 藍(lán)綠色 奧沙西泮 淡黃綠色,,,,,4.分解產(chǎn)物的反應(yīng) 本類藥物多為有機(jī)氯化合物，用氧瓶燃燒法破壞，顯氯化物反應(yīng)。Ch.P用于地西泮和三唑侖藥物的鑒別。,（二）紫外特征吸收和紅外吸收光譜 藥物名稱 溶 劑 濃度（μg/ml） λmax（nm）

18、 A 地西泮 0.5%硫酸甲醇溶液 5 242 約0.51 282         約0.23

19、 366 氯氮卓 鹽酸溶液(9→1000) 7 245,308 阿普唑侖 鹽酸溶液(9→1000) 12 264 鹽酸氟西泮 硫酸甲醇(1→36) 10 239±2,284±2 比值1.95～2.50

20、 362±2 氯硝西泮 0.5%硫酸甲醇溶液 10 239±2,307±2 奧沙西泮 乙醇 10 229, 315±2(較弱) 紅外吸收光譜:已用于地西泮、阿普唑侖、艾司唑侖、鹽酸氟西 泮、氯硝西泮和奧沙西泮的鑒別。,（一）有關(guān)物質(zhì)檢查 Ch.P

21、收載的八種本類藥物，除氯氮卓外，其余均作此項(xiàng)檢查。其檢查方法除了三唑侖采用GC法外，其余均用TLC法進(jìn)行檢查。USP(24)和BP(2000)中對(duì)氯氮卓都規(guī)定了此項(xiàng)檢查，而且均用TLC法進(jìn)行檢查。,三、特殊雜質(zhì)檢查,1.地西泮中有關(guān)物質(zhì)的檢查 地西泮在合成過程中因其副反應(yīng)， 可能引入N-去甲基苯甲二氮卓及化學(xué)結(jié)構(gòu)不清的有關(guān)物質(zhì)，可 采用TLC法中的高低濃度對(duì)比法進(jìn)行檢查。 2.氯氮卓中有關(guān)物質(zhì)的檢查 USP(24

22、)用TLC法檢查氯氮卓中的 有關(guān)物質(zhì)，并規(guī)定其分解產(chǎn)物2-氨基-5-氯-2-苯甲酮含量不得 過0.01%；中間體7-氯-1，3-二氫-5-苯基-2H-1，4-苯并二氮雜卓-2-酮-4-氧化物含量不得過0.1%。,(二) 降解產(chǎn)物的檢查 地西泮注射液列入此項(xiàng)檢查，因本品在貯藏過程中有可能分解成2-甲氨基-5-氯-二苯甲酮等雜質(zhì)。采用HPLC法進(jìn)行檢查。,返 回,一、非水溶液滴定法(一) 基本原理,,第四節(jié) 含量

23、測(cè)定,當(dāng)HA酸性較強(qiáng)時(shí)，反應(yīng)不能定量完成，必須除去或降低HA的酸性，使反應(yīng)順利地完成。,BH+?A-,+,HClO4,BH+?ClO4,+,HA,,游離堿類鹽,,被置換出的弱酸,因此，要根據(jù)不同情況采用相應(yīng)測(cè)定條件。,,(二) 一般方法,供試品,+,冰醋酸,10ml~30ml,,若供試品為氫鹵酸鹽再加5%醋酸汞的冰醋酸液3ml~5ml,,,結(jié)果,,高氯酸滴定液滴定,,以空白試驗(yàn)校正,(三) 問題討論1.適用范圍 主要用于Kb＜10-

24、8的有機(jī)堿鹽的含量測(cè)定。對(duì)堿性較弱 的雜環(huán)類藥物，只要選擇合適的溶劑、滴定劑和終點(diǎn)指示的方法， 可使pKb為8～13的弱堿性藥物采用本法滴定。 一般來說： Kb為10-8～10-10時(shí)，宜選冰醋酸作為溶劑；　　　藥物的 Kb為10-10～10-12時(shí)，宜選冰醋酸與醋酐的混合溶液； Kb＜10-12時(shí)，應(yīng)用醋酐作為溶劑。 另外，在冰醋酸中加入不同量的甲酸，也能使滴定突躍顯著增

25、大，使一些堿性極弱的雜環(huán)類藥物獲得滿意測(cè)定結(jié)果。,,2.酸根的影響：無機(jī)酸類，在醋酸介質(zhì)中的酸性以下列排序遞減： 高氯酸＞氫溴酸＞硫酸＞鹽酸＞硝酸 消除HX干擾的方法：加Hg(Ac)2 量不足終點(diǎn)不明顯，結(jié)果偏低。 2B·HX + Hg(Ac)2 → 2B·HAc + HgX2,,過量(1～3倍)不影響測(cè)定結(jié)果,3.終點(diǎn)指示方法 常用電位法和指示劑法 Ch.P收載的本類

26、藥物大多采用結(jié)晶紫指示劑指示終點(diǎn)，少數(shù)采用電位法指示終點(diǎn)。,(四) 應(yīng)用實(shí)例 1.游離弱堿性藥物測(cè)定 異煙肼、尼可剎米、地西泮及氯氮卓等?；谶@些藥物分子結(jié)構(gòu)中氮原子的弱堿性，可用非水溶液滴定法直接測(cè)定其含量。由于這些藥物的堿性強(qiáng)弱不同，測(cè)定時(shí)所采用溶劑、指示劑及其指示終點(diǎn)的方法也不盡相同。 藥物名稱 取樣量(g) 溶 劑 指示劑 終點(diǎn)顏色 尼可剎米

27、 0.15 冰醋酸10ml 結(jié)晶紫 藍(lán)綠色 地西泮 0.2 冰醋酸、酸酐10ml 結(jié)晶紫 綠色 氯氮卓 0.3 冰醋酸10ml 結(jié)晶紫 藍(lán)色,,2.氫鹵酸鹽類藥物測(cè)定 當(dāng)這些藥物溶于冰醋酸時(shí)，由于氫鹵酸在冰醋酸中酸性較強(qiáng)，對(duì)測(cè)定有干擾，必須先加入過量的醋酸汞冰醋酸溶液，使其形

28、成難以電離的鹵化汞，而氫鹵酸鹽藥物，則轉(zhuǎn)變成可測(cè)定的醋酸鹽。然后再用高氯酸滴定液滴定，并可獲得滿意的結(jié)果。應(yīng)用示例如下： 藥物名稱 取樣量(g) 溶 劑 加入醋酸汞試液(ml) 指示劑 終點(diǎn)顏色 鹽酸氯丙嗪 0.2 醋酐10ml 5 橙黃Ⅳ 玫瑰紅色 鹽酸異丙嗪 0.3 冰醋酸10ml 4

29、 結(jié)晶紫 藍(lán)色 鹽酸氟奮乃靜 0.3 冰醋酸20ml 5 結(jié)晶紫 藍(lán)綠色 鹽酸環(huán)丙沙星 0.2 冰醋酸25ml 5 橙黃Ⅳ 粉紅色 氫溴酸東莨菪堿 0.3 冰醋酸20ml 5 結(jié)晶紫 純藍(lán)色 鹽酸硫利達(dá)嗪

30、 0.3 丙酮100ml 5 電位滴定法,3.硫酸鹽類藥物測(cè)定 硫酸是二元酸，在水溶液中能完成二級(jí)解離，生成SO42-，但在非水介質(zhì)中，只顯示一元酸解離為HSO4-，即只供給一個(gè)H+，所以硫酸鹽類藥物在冰醋酸中，只能滴定至硫酸氫鹽，因此可以用高氯酸滴定液直接滴定。,（1）硫酸阿托品測(cè)定：阿托品為堿性較強(qiáng)的 一元堿藥物，因而硫酸阿托品的化學(xué)結(jié)構(gòu)式可以 簡(jiǎn)寫為(