2023年全國(guó)碩士研究生考試考研英語(yǔ)一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁(yè)
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1、第二章 生物組織冷凍切片技術(shù),冷凍切片技術(shù),冷凍切片(frozen section)是一種在低溫條件下,將動(dòng)物、植物組織快速冷卻到一定硬度,然后進(jìn)行切片的方法。因其制作過程較石蠟切片快捷、簡(jiǎn)便,而應(yīng)用廣泛。冷凍切片的種類較多,有低溫恒冷箱冷凍切片法,二氧化碳冷凍切片法,甲醇循環(huán)制冷冷凍切片法等。,2.1 CM 1900簡(jiǎn)介,CM 1900是徠卡奉獻(xiàn)給廣大用戶用于各種已知低溫冷凍切片的真正有效的儀器。 冷凍切片機(jī)用來

2、將生物組織的標(biāo)本快速冷凍后,將標(biāo)本在低溫狀態(tài)下進(jìn)行微米級(jí)的超薄切片,為生物組織的分析研究提供快速優(yōu)良的組織切片。特點(diǎn):·新型CM 1900的特色之一是具有大型冷凍室,可冷卻到-35°C。·該儀器還提供一個(gè)獨(dú)立的樣品冷卻系統(tǒng),樣品夾溫度的調(diào)節(jié)范圍達(dá)到-10°C到-50°C,可進(jìn)行不同類型的樣品切片,每一樣品托有各自獨(dú)立的溫度,并可在很短的時(shí)間內(nèi)達(dá)到所需溫度,快速冷凍臺(tái)保持在-

3、45°C,可同時(shí)放多達(dá)10個(gè)樣品,并和一個(gè)可持續(xù)冷卻的吸熱器相連,可保證樣品托上的樣品快速冷卻.高質(zhì)量,無焊接縫的不銹鋼冷凍室表面光滑,利于清潔和防止污染。,規(guī)格參數(shù):1.        切片厚度:1至60um2.        最大樣品:55 mm直徑3. &#

4、160;      樣品臂前后移動(dòng):25 mm4.        樣品臂上下移動(dòng):59 mm5.    樣品臂前后移動(dòng)速度:0.8mm/秒 冷凍箱溫度:0至-35℃6.      

5、60; 冷凍箱降溫至:-35℃約4小時(shí)7.        除霜功能:以熱氣9分鐘除霜,可自由于24小時(shí)內(nèi)設(shè)置開始時(shí)間8. 可隨時(shí)按制即時(shí)除霜. 快速冷凍臺(tái):至-45℃9.        機(jī)身大小(長(zhǎng)/深/高):890/730/1200mm10.   

6、 機(jī)身重量(連機(jī)切片):180kg11.     獨(dú)特雙壓縮作樣品快速冷凍及穩(wěn)定冷凍切片溫度12.     樣品快速冷凍:-10℃至-50℃,2.2 操作,,2.3 維護(hù),2.4 故障排除,2.5. 冷凍切片的一點(diǎn)體會(huì),取材,未能固定的組織取材,不能太大太厚,厚者冰凍費(fèi)時(shí),大者難以切完整,最好為正方或長(zhǎng)方體:1×1×0.5cm ;

7、0.5 ×0.5×0.5cm 。 取出組織支承器,放平擺好組織,周邊滴上包埋劑,速放于冷凍臺(tái)上,冰凍。小組織的應(yīng)先取一支承器,滴上包埋劑讓其冷凍,形成一個(gè)小臺(tái)后,再放上細(xì)小組織,滴上包埋劑。 將冷凍好的組織塊,夾緊于切片機(jī)持承器上,啟動(dòng)粗進(jìn)退鍵,轉(zhuǎn)動(dòng)旋鈕,將組織修平。調(diào)好欲切的厚度,根據(jù)不同的組織而定,原則上是細(xì)胞密集的薄切,纖維多細(xì)胞稀的可稍為厚切,一般在5~10um間。,調(diào)好防卷板。制作冰凍切片,關(guān)鍵在于防

8、卷板的調(diào)節(jié)上,這就要求操作者要細(xì)心,準(zhǔn)確地將其調(diào)較好,調(diào)校至適當(dāng)?shù)奈恢?。切片時(shí),切出的切片能在第一時(shí)間順利地通過刀防卷板間的通道,平整地躺在持刀器的鐵板上。這時(shí)便可掀起防卷板,取一載玻片,將其附貼上即可。 應(yīng)視不同的組織選擇不同的冷凍度。冷凍箱中冷凍度的高低,主要根據(jù)不同的組織而定,不能一概而論。如:切未經(jīng)固定的腦組織,肝組織和淋巴結(jié)時(shí),冷凍箱中的溫度不能調(diào)太低,在-10- -15℃左右,切甲狀腺、脾、腎、肌肉等組織時(shí),可調(diào)在-15~

9、20℃左右,切帶脂肪的組織時(shí),應(yīng)調(diào)至-25℃左右,切含大量的脂肪時(shí),應(yīng)調(diào)至-30℃。,2.6 冰凍切片時(shí)的注意事項(xiàng):,防卷板及切片刀和持刀架上的板塊應(yīng)保持干凈,需經(jīng)常用毛筆挑除切片殘余和用柔軟的紙張擦。有時(shí)需要每切完一張切片后就用紙擦一次。因?yàn)檫@個(gè)地方是切片通過和附貼的地方,如果有殘余的包埋劑粘于刀或板上,將會(huì)破壞甚至撕裂切片,便切片不能完整切出。多例多塊組織同時(shí)需做冰凍切片時(shí),可各自放于不同的支承器上,于冷凍臺(tái)上凍起來,然后依據(jù)不同

10、的編號(hào),依序切片,這樣做既不費(fèi)時(shí)也不會(huì)亂。,放置組織冰凍前,應(yīng)視組織的形狀及走勢(shì)來放置,所謂“砍柴看柴勢(shì)”,切片也是如此,如果胡亂放置,就不能收到很好的效果。 組織塊不須經(jīng)各種固定液固定,尤其是含水的固定液,在未達(dá)到固定前,更不能使用。臨床快速冰凍切片,不須要預(yù)先固定,一是為了爭(zhēng)取時(shí)間,二是固定了的組織,反而增加了切片的難度。如果使用未完全固定的組織做冰凍切片,就會(huì)出現(xiàn)冰晶。這是因?yàn)楹墓潭ㄒ涸诮M織未經(jīng)固定前,其中的水份也可滲入到組

11、織中去,當(dāng)冰凍發(fā)生時(shí),這些水份就存留于組織中,形成了冰晶。,當(dāng)切片時(shí),如果發(fā)現(xiàn)冰凍過度時(shí),可將冰凍的組織連同支承器取出來,在室溫停留片刻,再行切片,或者用口中哈氣,或者用大拇指按壓組織塊,以此來軟化組織,再行切片。另者,調(diào)高冰凍點(diǎn)。用于附貼切片的載玻片,不能存放于冷凍處,于室溫存放即可。因?yàn)楫?dāng)附貼切片時(shí),從室溫中取出的載玻片與冷凍箱中的切片有一種溫度差,當(dāng)溫度較高的載玻片附貼上溫度較低的切片時(shí),由于兩種物質(zhì)間溫度的差別,當(dāng)它們碰撞在一

12、起時(shí),分子彼此間發(fā)生轉(zhuǎn)移而產(chǎn)生了一種吸附力,使切片與載玻片牢固地附貼在一起。如果使用冷藏的載玻片來附貼切片,由于溫度相同,沒有發(fā)生上述的現(xiàn)象。,2.7 HE染色介紹,蘇木精 — 伊紅染色法 ( hematoxylin-eosin staining ) ,簡(jiǎn)稱HE染色法 ,石蠟切片技術(shù)里常用的染色法之一 。蘇木精染液為堿性 ,主要使細(xì)胞核內(nèi)的染色質(zhì)與胞質(zhì)內(nèi)的核糖體著紫藍(lán)色 ;伊紅為酸性染料 ,主要使細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞外基質(zhì)中的成分著紅色 。HE

13、染色法是組織學(xué)、胚胎學(xué)、病理學(xué)教學(xué)與科研中最基本、使用最廣泛的技術(shù)方法。,染色結(jié)果 細(xì)胞核被蘇木精染成鮮明的藍(lán)色,軟骨基質(zhì)、鈣鹽顆粒呈深藍(lán)色,粘液呈灰藍(lán)色。細(xì)胞漿被伊紅染成深淺不同的粉紅色至桃紅色,胞漿內(nèi)嗜酸性顆粒呈反光強(qiáng)的鮮紅色。膠原纖維呈淡粉紅色,彈力纖維呈亮粉紅色,紅血球呈橘紅色,蛋白性液體呈粉紅色。 著色情況與組織或細(xì)胞的種類有關(guān),也隨其生活周期及病理變化而改變。例如,很多細(xì)胞在新生時(shí)期胞漿對(duì)伊紅著色較淡或輕度嗜

14、堿,當(dāng)其衰老時(shí)或發(fā)生退行性變則呈現(xiàn)嗜伊紅濃染。膠原纖維在老化和出現(xiàn)透明變性時(shí),伊紅著色由淺變深。,2.7.1 試劑配置,0.5~1% 的伊紅酒精溶液: 稱取伊紅Y 0.5~1 g,加少量蒸餾水溶解后,再滴加冰醋酸直至漿糊狀。以濾紙過濾,將濾渣在烘箱中烤干后,以95%酒精(即工業(yè)酒精,如果不怕浪費(fèi),用無水乙醇配制也可)100毫升溶解。,蘇木素染液配方:(配制3000 ml,可按比列減少),蘇木精 6 g   無水乙醇 100

15、ml   硫酸鋁鉀 150 g   蒸餾水 2000 ml   碘酸鈉 1.2 g   冰醋酸 120 ml   甘油 900 ml  配制方法:將蘇木素溶于無水乙醇,再將硫酸鋁鉀溶于蒸餾水,溶解后將甘油傾入一起混合,最后加入冰醋酸和碘酸鈉。,1%鹽酸酒精分化液:將1毫升濃鹽酸加入99毫升70%酒精中即可。促藍(lán)液:1% 濃氨水溶液(1:99),2.7.2 改進(jìn)的冷凍切片HE染色步驟,固定 切好的切片用95 %乙醇95 m

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