萊克多巴胺膠體金試紙條的研制.pdf

1、簍萎大學(xué)工程碩士專業(yè)學(xué)位論文萊克多巴胺膠體金試紙條的研制StudyontheRactopamineColloidalGoldTestStrip萊克多巴胺膠體金試紙條的研制摘要萊克多巴胺是一種Bz腎上腺素受體激動(dòng)劑，當(dāng)添加到飼料中，可以提高動(dòng)物的瘦肉率。但是當(dāng)人食用了含有超過(guò)一定劑量萊克多巴胺的動(dòng)物組織后，就會(huì)對(duì)人體造成不同程度的傷害。目前，對(duì)萊克多巴胺的檢測(cè)主要是采用色譜法，但色譜法的前處理過(guò)程繁瑣、成本高、需要專門的檢測(cè)儀器，這不適合

2、大規(guī)模的推廣。故建立一個(gè)高效、快速的萊克多巴胺檢測(cè)方法具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。本實(shí)驗(yàn)采用檸檬酸三鈉還原的方法來(lái)制備膠體金。采用單因素試驗(yàn)，通過(guò)改變檸檬酸三鈉加入量、加熱時(shí)間、轉(zhuǎn)速和反應(yīng)物的添加順序，對(duì)膠體金制備工藝進(jìn)行優(yōu)化，結(jié)果發(fā)現(xiàn)在1％檸檬酸三鈉溶液加入量為18mL、加熱時(shí)間10min、轉(zhuǎn)速為300r／min條件下，采用檸檬酸三鈉加入到氯金酸的添加順序可以制備質(zhì)量較好的膠體金溶液。采用紫外可見(jiàn)光譜法確定膠體金顆粒的粒徑和均一度。通過(guò)實(shí)驗(yàn)發(fā)

3、現(xiàn)，所制備的膠體金粒徑大約在184nln，通過(guò)觀察膠體金溶液的可見(jiàn)光譜，發(fā)現(xiàn)膠體金的均一度也比較好。優(yōu)化了免疫膠體金的制備條件，最佳蛋白標(biāo)記量為1318lg／mL，最適標(biāo)記pH為80，選擇終濃度為l％BSA為穩(wěn)定劑。對(duì)比了不同配方的重懸液，確定了配方2為含有1％BSA、1％蔗糖、01％Tween一20的磷酸鹽緩沖液。優(yōu)化了抗原和抗體的包被條件，抗原包被濃度為05mg／mL，二抗包被濃度為10rag／mE，金標(biāo)稀釋度為3倍，金標(biāo)墊干燥條件

4、為室溫條件下45rain，抗原包被條件為37℃，10rain。對(duì)比了三種不同型號(hào)的金標(biāo)墊(MA0270、GL0194和Ahlstrom8964)，三種不同型號(hào)硝酸纖維素膜(Sartorius140、Millipore135和PallVivid170)，四種不同型號(hào)的樣品墊(GL—b01、GLb02、GL—b03和GL。b04)、三種不周型號(hào)的吸水紙(HS5076、HS5080和HS5072)對(duì)試紙條性能的影響，最終選擇金標(biāo)墊的型號(hào)為MA

5、0270，Millipore135硝酸纖維素膜的型號(hào)為Millipore135，樣品墊的型號(hào)為GLb01，吸水紙的型號(hào)為HS5072。試紙條的靈敏度為20ng／mL，交叉反應(yīng)實(shí)驗(yàn)說(shuō)明所制各的試紙條與克倫特羅、沙丁胺醇、腎上腺素?zé)o交叉反應(yīng)。在室溫下試紙條可以保存2個(gè)月以上，在不同批次和同一批次內(nèi)重復(fù)性良好。對(duì)試紙條在實(shí)際檢測(cè)中的表現(xiàn)進(jìn)行了測(cè)試，樣品經(jīng)過(guò)簡(jiǎn)單的提取和除脂肪后，直接用于試紙條的測(cè)試，和傳統(tǒng)的LCMS的前處理方法相比較簡(jiǎn)便了很多