灰樹(shù)花發(fā)酵液多糖提取及其活性測(cè)定.pdf

1、1、利用平板培養(yǎng)和液體培養(yǎng)比較了8個(gè)灰樹(shù)花菌株。發(fā)現(xiàn)固體平板培養(yǎng)中，菌株的平均日生長(zhǎng)速度為5.0～6.5mm/d，菌絲體均為白色，216菌株、270菌株和275菌株的菌絲生長(zhǎng)量較慢，但是菌絲絨氈狀，生長(zhǎng)均勻，邊緣整齊，菌絲致密。搖瓶培養(yǎng)表明，菌株間的菌體干重差別不大，粗多糖含量以270菌株和275菌株最高，分別為7.7mg/mL和7.8mg/mL。發(fā)酵罐測(cè)試表明:隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)，pH逐漸降低，最后維持在pH3～4，菌絲體生長(zhǎng)量為20

2、～22mg/ml，總糖測(cè)試表明270菌株和275菌株可以達(dá)到30mg/mL，其它幾個(gè)菌株略低。
　　 2、采用響應(yīng)面分析中的Box-Behnken試驗(yàn)優(yōu)化了灰樹(shù)花胞內(nèi)多糖提取條件，結(jié)果表明，實(shí)驗(yàn)范圍內(nèi)多糖最佳提取條件為提取溫度92.53℃，浸提時(shí)間2.24h，水料比35.76∶1，在此條件下多糖的理論提取率為7.28％，驗(yàn)證值為7.15％。表明響應(yīng)面法能夠較好的分析提取溫度、提取時(shí)間及料水比等多個(gè)因素對(duì)灰樹(shù)花胞內(nèi)多糖提取的影響作

3、用，并且回歸方程的預(yù)測(cè)值與試驗(yàn)值符合度較高。
　　 3、研究了灰樹(shù)花多糖的提取純化方法。分別對(duì)胞內(nèi)多糖提取液和胞外多糖提取液進(jìn)行濃縮、除色素、脫蛋白處理，并利用乙醇進(jìn)行分步醇析。實(shí)驗(yàn)表明，胞內(nèi)多糖總產(chǎn)率為2.19g/L，胞外多糖總產(chǎn)率為1.68g/L，胞外多糖產(chǎn)率略低。通過(guò)對(duì)多糖組分進(jìn)行SephadexG-100分子篩柱層析，分離到胞內(nèi)多糖組分IP30-Ⅰ、IP60-Ⅰ、IP60-Ⅱ和IP83-Ⅱ，得到胞外多糖組分EP60-Ⅰ、

4、EP60-Ⅱ和EP83-Ⅰ。
　　 4、測(cè)試了灰樹(shù)花胞內(nèi)多糖對(duì)S180荷瘤昆明小鼠的抑瘤作用。荷瘤小鼠隨機(jī)分為四組:低劑量多糖組(200mg/kg.d)、高劑量多糖組(500mg/kg.d)、環(huán)磷酰胺陽(yáng)性對(duì)照組(20mg/kg.d)和生理鹽水陰性對(duì)照組。給藥10d后計(jì)算腫瘤抑制率。結(jié)果表明:與陰性對(duì)照組相比，低劑量多糖組和高劑量多糖組抑瘤率分別達(dá)到61.51％(P＜0.01)和44.42％(P＜0.01)，環(huán)磷酰胺組抑瘤率為73

5、.75％(P＜0.01)。測(cè)試了灰樹(shù)花多糖不同組分對(duì)肝癌Hep細(xì)胞的體外抑制試驗(yàn)，以蒸餾水為陰性對(duì)照組、以氟尿嘧啶為陽(yáng)性對(duì)照組。結(jié)果表明:胞內(nèi)多糖的抑制效果好于胞外多糖，其中最高可以達(dá)到抑制率66％。
　　 5、測(cè)定了灰樹(shù)花發(fā)酵液胞內(nèi)多糖的單糖組份及其摩爾比。將胞內(nèi)多糖IP30、IP30-Ⅰ、IP60、IP60-Ⅰ、IP60-Ⅱ分別水解為單糖，采用HPLC法測(cè)定其組成及摩爾比。結(jié)果表明:IP30含8種單糖，IP30-Ⅰ則由7種單