棉花ph1基因的克隆與功能分析.pdf

1、棉花是我國的主要經(jīng)濟作物之一，棉花纖維品質(zhì)的改良長期以來備受人們關(guān)注。棉花也是人們衣被和日用紡織品的主要原料，大多數(shù)布料都要經(jīng)過有機顏料染色，而其中大部分有機染料都是有毒的?，F(xiàn)在醫(yī)學研究表明，服飾布料由于印染而殘留的有毒化學物質(zhì)和染料殘留物，會引起皮膚過敏、搔癢，甚至通過皮膚滲透進入血管和內(nèi)臟，長期累積于體內(nèi)，損害人們的身體健康。而彩棉服飾則沒有上述危害，相反它質(zhì)地柔軟、透氣、吸汗、富有彈性，穿著舒適，有利于保護人們的身體健康。隨著生活

2、水平的提高和對健康日益重視，人們對天然彩色棉的需求大大增加。目前，天然棉花纖維主色為白色，雖然有棕色和綠色，但色彩較為單調(diào)很難滿足人們的日常需求。因此，拓寬彩色棉色譜，對彩色棉產(chǎn)業(yè)的發(fā)展具有舉足輕重的作用。
　　 目前，在棉花自身調(diào)控顏色的基因還沒有克隆出來情況下，棉花纖維顏色的改良大部分依賴于棉花以外的基因資源，因此克隆棉花自身調(diào)控顏色的基因顯得尤為重要。本試驗以矮牽?；ㄉ膒h1基因（登陸號AB027455）為探針對棉花ES

3、T數(shù)據(jù)庫進行BLAST檢索，獲得多條與之高度相似的棉花EST序列；將獲得的EST序列進行首尾拼接,獲得新的Contig；以獲得的Contig反復(fù)對棉花EST公共數(shù)據(jù)庫進行BLAST檢索、拼接,盡可能獲得全長cDNA；根據(jù)獲得的序列設(shè)計引物，克隆出調(diào)節(jié)棉花纖維pH值的基因，將其命名為ph1基因，并應(yīng)用生物信息學軟件對其蛋白質(zhì)的功能進行了預(yù)測分析，同時構(gòu)建植物表達載體，通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)法轉(zhuǎn)化小擬南芥，對所克隆的棉花ph1新基因進行初步的功能驗

4、證。同時將含有色素基因的pCAMBIA2301-PchsA-F3’5’H–difF載體通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)法成功的轉(zhuǎn)化到了粉色矮牽牛中，成功獲得轉(zhuǎn)基因植株。
　　 本研究通過電子克隆和分子生物學的方法，已經(jīng)成功克隆獲得棉花ph1基因，其全長1378bp，最大開放閱讀框長度為1248bp,編碼416個氨基酸；并且構(gòu)建了植物表達載體pBI121-ph1及RNAi載體2300-pUCCRNAi-phsh，通過農(nóng)桿菌GV3101浸染了小擬南芥