家蠶中球孢白僵菌結(jié)合蛋白CI7A的鑒定.pdf

1、球孢白僵菌(Beauveria bassiana)是一種昆蟲致病性真菌，由于其具有高效低毒，宿主范圍廣的特點(diǎn)，現(xiàn)已被作為生物殺蟲劑廣泛應(yīng)用。球孢白僵菌對(duì)昆蟲的侵染主要是利用發(fā)芽管分泌的表皮降解酶和機(jī)械壓力穿透昆蟲的表皮，進(jìn)入宿主體腔分泌蛋白酶和毒素，吸取宿主營養(yǎng)，最終導(dǎo)致昆蟲死亡。昆蟲與真菌協(xié)同進(jìn)化，形成了先天性免疫體系來抵御真菌的侵染。當(dāng)微生物侵染昆蟲時(shí)，昆蟲能通過Toll和Imd信號(hào)途徑產(chǎn)生不同的抗菌肽對(duì)其進(jìn)行抑殺。此外，昆蟲通過前

2、酚氧化酶級(jí)聯(lián)系統(tǒng)產(chǎn)生的黑色素，體液免疫產(chǎn)生的抗真菌蛋白以及細(xì)胞免疫等對(duì)真菌也具有防衛(wèi)作用。雖然家蠶(Bombyx mori)基因組框架序列在2004年已被測(cè)定，極大地推動(dòng)了家蠶先天性免疫方面的研究，但是家蠶抵御真菌方面的研究仍然較少。
　　 本研究將家蠶幼蟲體液蛋白和球孢白僵菌分生孢子一起孵育，對(duì)家蠶體液中存在的能與球孢白僵菌相結(jié)合的蛋白進(jìn)行了MALDI-TOF-MS質(zhì)譜鑒定，獲得了四個(gè)球孢白僵菌結(jié)合蛋白，其中β-1，3-葡聚糖

3、識(shí)別蛋白，脂蛋白30K(6G1)和抗菌肽attacin三種蛋白是已知的能與真菌相互作用的蛋白。隨后對(duì)首次鑒定得到的真菌結(jié)合蛋白CI8A進(jìn)行了較為深入的研究。首先原核表達(dá)并純化了CI8A融合蛋白，制備了CI8A抗體。通過調(diào)查CI8A在被球孢白僵菌誘導(dǎo)后mRNA和蛋白質(zhì)水平的變化，發(fā)現(xiàn)CI8A的mRNA轉(zhuǎn)錄本誘導(dǎo)后上調(diào)，而蛋白質(zhì)水平上基本沒有變化。此外，采用Western blotting手段證明了CI8A不僅能與球孢白僵菌結(jié)合，而且能與真