畢業(yè)設計（論文）--縮宮素的質量鑒定

1、<p>　　2012屆畢業(yè)設計（論文）</p><p>　　題 目： 縮宮素的質量鑒定</p><p><b>　　學 院：藥學院</b></p><p><b>　　專 業(yè)：藥學類</b></p><p>　　班 級：藥學0803</p><p><b>

2、;　　姓 名：XX</b></p><p>　　指導教師：起訖日期： 2012年2月～2012年6月 </p><p><b>　　縮宮素的質量鑒定</b></p><p><b>　　摘 要</b></p><p>　　縮宮素為一種多肽激素，自20世紀50年代合成純化的縮宮素后，一直被

3、廣泛應用于臨床，尤其在引產(chǎn)或催產(chǎn)中有著重要的使用價值，為產(chǎn)科必備藥，所以縮宮素需求量巨大。</p><p>　　通過對本品的性狀、鑒別、檢查、效價測定等方面進行研究，本文確定縮宮素生物測定法為本品效價的測定方法，本法具有簡便、準確等優(yōu)點。參照縮宮素溶液質量標準和《中國藥典》2005年版二部的有關規(guī)定，對公司生產(chǎn)的縮宮素得相關質量進行了研究工作。</p><p>　　關鍵詞：縮宮素 縮宮

4、素生物測定法 效價限度</p><p>　　Oxytocin quality appraisal</p><p><b>　　Abstract</b></p><p>　　Oxytocin as a peptide hormone, since the 1950 s the synthesis of oxytocin purification

5、, and have been widely used in clinical, especially in induced labor or oxytocin plays an important use value, for maternity essential medicine, so oxytocin huge demand.</p><p>　　This article through the cha

6、racter, the identification, inspection, titer determination, is determined in this paper oxytocin bioassays for this product titer determine methods, this method has such advantages as simple and accurate. Reference solu

7、tion quality standards and oxytocin the China pharmacopeia (2005 edition of the relevant provisions of the production of the company of oxytocin quality related research work.</p><p>　　Key Words: Oxytocin

8、 oxytocin bioassays titer limit</p><p><b>　　目 錄</b></p><p>　　中文摘要………………………………………………………………………………………ⅠABSTRACT…………………………………………………………………………………Ⅱ</p><p>　　文獻綜述………………………………

9、………………………………1</p><p>　　1.1藥品名稱………………………………………………………………………………1</p><p>　　1.2立體背景………………………………………………………………………………1</p><p>　　1.2.1引產(chǎn)………………………………………………………………………………2</p><p>　　1

10、.2.2催產(chǎn)………………………………………………………………………………2</p><p>　　1.2.3治療產(chǎn)后出血……………………………………………………………………2</p><p>　　1.2.4禁忌癥……………………………………………………………………………3</p><p>　　1.3立題依據(jù)和目的………………………………………………………………………3

11、</p><p>　　1.3.1有關本品的研究開發(fā)、生產(chǎn)、銷售及臨床應用情況的概述：………………4</p><p>　　1.3.2知識產(chǎn)權情況……………………………………………………………………4</p><p>　　1.4藥理毒理研究資料綜述………………………………………………………………4</p><p>　　1.4.1藥代動力學…………

12、……………………………………………………………5</p><p>　　1.4.2縮宮素的生理作用………………………………………………………………5</p><p>　　1.4.3藥理作用和給藥方式……………………………………………………………5</p><p>　　1.4.4藥物相互作用……………………………………………………………………6</p>&

13、lt;p>　　第二章 實驗部分………………………………………………………………8</p><p>　　2.1 效價限度…………………………………………………………………………8</p><p>　　2.2 性狀………………………………………………………………………………8</p><p>　　2.3 鑒別………………………………………………………

14、………………………8</p><p>　　2.4 檢查………………………………………………………………………………11</p><p>　　2.4.1 pH值…………………………………………………………………11</p><p>　　2-4-2氨基酸比值……………………………………………………………11</p><p>　　2-4-3升壓物質

15、………………………………………………………………11</p><p>　　2-4-4細菌內(nèi)毒素……………………………………………………………11</p><p>　　2.5 效價測定…………………………………………………………………………13</p><p>　　2-5-1儀器設備…………………………………………………………………13</p><

16、p>　　2-5-2測定方法…………………………………………………………………13</p><p>　　2-5-3方法學考察………………………………………………………………13</p><p>　　2-5-4樣品效價測定結果………………………………………………………14</p><p>　　2.6 結論………………………………………………………………………………

17、15</p><p>　　結語………………………………………………………………………………………16</p><p>　　參考文獻…………………………………………………………………………………17</p><p>　　致謝………………………………………………………………………………………18</p><p>　　第一章 文獻綜述&

18、lt;/p><p><b>　　1.1 藥品名稱</b></p><p><b>　　通用名：縮宮素溶液</b></p><p>　　英文名：Oxytocin Solution</p><p>　　漢語拼音：Suogongsu Rongye</p><p>　　化學名：半胱

19、氨酰-酪氨酰-異亮氨酰-谷氨酰(酰胺)-天門冬氨酰(酰胺)-半胱氨酰-脯氨酰-亮氨酰-甘氨酰胺(1-6二硫鍵)。</p><p>　　結構式：本品結構為含有二硫鍵的9個氨基酸組成的肽鏈。</p><p>　　H-Cys-Tyr-Ile-Glu(NH2)-Asp(NH2)-Cys –Pro-Leu-Gly-NH2 </p><p>　　分子式：C43H66N12O12

20、S2</p><p>　　分子量：1007.2</p><p>　　命名依據(jù)及分類：本品為已有國家標準的藥品，其質量標準收載于地標升國標第9冊，標準號WS-10001-(HD-0903)-2002，按照標準上的名稱將本品命名為縮宮素溶液。根據(jù)藥品注冊分類，本品屬于化學藥品6類。</p><p><b>　　1.2 立題背景</b></p&

21、gt;<p>　　縮宮素為一種多肽激素，自20世紀50年代合成純化的縮宮素后，一直被廣泛應用于臨床，其主要作用機制為促進子宮平滑肌收縮。子宮對縮宮素的敏感性與子宮肌組織中縮宮素受體含量有關，個體差異較大，在產(chǎn)程中如使用得當則安全有效，可起到減少難產(chǎn)率及剖宮產(chǎn)率得作用；反之，可危及母兒生命。</p><p><b>　　1.2.1引產(chǎn) </b></p><p&

22、gt;　　縮宮素適用于過期妊娠及妊娠中斷，一般引產(chǎn)成功率為90％。</p><p>　　過期妊娠是指妊娠超過42周尚未臨產(chǎn)者。過期妊娠的原因，多數(shù)學者認為是由于妊娠末期孕激素過高而雌激素過少所致。這樣妊娠子宮對內(nèi)源縮宮素部敏感，因此，過期妊娠引產(chǎn)時，在口服雌激素制劑（如乙烯雌酚）3天后，開始給予縮宮素5-10µ/L的濃度，以6-10滴/min的速度滴入，并嚴密觀察宮縮及胎心音變化。如果藥物引產(chǎn)效果不佳，

23、可采用其他方法。</p><p>　　中斷妊娠系指在妊娠14周后，即失去早期人工流產(chǎn)機會而又必須中斷妊娠者，可用縮宮素配合其他方法（如水囊引產(chǎn)、利凡諾爾引產(chǎn)法）進行引產(chǎn)。</p><p>　　妊娠中期引產(chǎn)，目前在理論和實踐中存在著許多沒有解決的問題。臨床上單獨使用縮宮素藥物引產(chǎn)，效果常常不理想，其主要原因可能仍與孕酮水平較高和雌激素水平較低有關，以及前列腺素分泌不足。中孕時子宮蛻膜發(fā)育不完

24、善，蛻膜受體乏感應所致，或許因為胎頭未直接壓迫宮頸。因此中孕使用縮宮素引產(chǎn)，要求藥物濃度高，劑量大、適當?shù)牡巫⑺俣?。常?0-20µ加入5％葡萄糖500ml中，以40滴/min速度靜脈點滴。</p><p><b>　　1.2.2催產(chǎn)</b></p><p>　　縮宮素催生，主要用于原發(fā)性或繼發(fā)性宮縮乏力者。一般催產(chǎn)成功率為98％。在正常情況下，臨產(chǎn)宮縮是具

25、有一定的強度、頻率、持續(xù)時間、間歇時間。當宮縮乏力時，產(chǎn)程延長甚至出現(xiàn)滯產(chǎn)，可危及胎兒生命。恰當使用縮宮素，是非常必要和重要的。由于每個產(chǎn)婦的個體差異，所以對縮宮素的敏感程度不一。所需劑量和濃度也不盡相同。因此臨床上一般采用2-5µ縮宮素加入到5％葡萄糖500ml中靜脈滴注。一般以8-10滴/min開始?？s宮素對子宮迅速發(fā)生作用，一般3-5分鐘后就出現(xiàn)宮縮，停藥后仍可維持半小時。使用縮宮素催產(chǎn)，必須嚴密觀察宮縮情況。應控制宮縮

26、在2-5分鐘1次，每次持續(xù)40-60秒。并要嚴格觀察宮口開大程度，其擴張速度至少為0.5cm/h以上。同時注意胎心音的變化，防止胎兒窘迫癥的發(fā)生。用縮宮素催生，注意產(chǎn)程的變化，監(jiān)測產(chǎn)婦血壓、脈率，隨時調節(jié)滴數(shù)。如果發(fā)生血壓升高，胎心異?；蜃訉m強直收縮，要立即停止縮宮素滴注。</p><p>　　1.2.3治療產(chǎn)后出血</p><p>　　產(chǎn)后出血為產(chǎn)婦嚴重危急并發(fā)癥之一。處理產(chǎn)后出血，應迅

27、速查明原因進行緊急止血。給予麥角新堿注射液或用縮宮素10µ加入25％葡萄糖40ml中靜脈緩注。當胎兒娩出后，為了促進胎盤剝離和子宮復原以及預防產(chǎn)后出血，應常規(guī)給予縮宮素10-20µ加入葡萄糖500ml液體中靜滴。吳堅、周漫天報道，湖南省株洲化工集團公司醫(yī)院還進行了縮宮素治療藥物流產(chǎn)后出血臨床觀察的研究：治療組81例，對照組72例。兩組藥物流產(chǎn)方法相同，即米非司酮，早50mg、晚25mg、共空服2d，第3d晨空腹頓服米

28、素前列醇片600µg，當日來院留觀6-10h。無論孕囊是否完整排出。治療組：留觀當日出現(xiàn)陰道流血后，加用縮宮素10µ，肌注Q1h×6次;對照組：加用VitC0.2g，3次/d，口服，連用5d，作安慰劑。兩組藥流后8d，15d，42d門診或電話隨訪。結果治療組治愈率達77.8%，總有效率93.83%；對照組治愈41.7%，總有效率80.5%，經(jīng)統(tǒng)計學處理，兩組有顯著性差異，治療組明顯優(yōu)于對照組。</p&

29、gt;<p><b>　　1.2.4禁忌癥：</b></p><p>　　明顯頭盆不相稱、完全性前置胎盤、產(chǎn)道梗阻、雙胎或多胎，以及瘢痕子宮特別是深入宮腔的子宮肌瘤剔除術和子宮體部剖宮產(chǎn)者，嚴重的胎盤功能低下及胎兒宮內(nèi)窘迫，嚴重的心肺功能不良，均應作為應用縮宮素的禁忌癥。</p><p><b>　　注意事項：</b></p&

30、gt;<p>　　1.2.4.1在縮宮素催產(chǎn)過程中，要注意防止低鈉血癥和低滲透壓的發(fā)生，5%的葡萄糖作溶劑經(jīng)代謝迅速形成血管內(nèi)低滲溶液，尤其輸液總量>2000ml時，產(chǎn)婦及新生兒低鈉血癥和低滲透壓發(fā)生率更高，而低鈉時新生兒黃疸的發(fā)生率增高，因此輸液達1000ml時，應加適量含鈉溶液，輸液總量應≤2000ml。</p><p>　　1.2.4.2應嚴格鑒別產(chǎn)婦是真臨產(chǎn)還是假臨產(chǎn)，對于假臨產(chǎn)嚴禁使

31、用縮宮素。</p><p>　　1.2.4.3對胎位不正，軟產(chǎn)道梗阻未糾正以前，不允許應用縮宮素催產(chǎn)。</p><p>　　1.2.4.4嚴格掌握縮宮素用量?？s宮素用量過大、濃度過高、滴素過快能夠引起子宮強直收縮，甚至子宮破裂，直接危及母子生命，所以都要從常規(guī)用量開始，嚴格觀察宮縮變化，胎心音變化，對于已出現(xiàn)強直收縮的要用杜冷丁、魯米那等藥物治療，阿托品等抗膽堿藥物無效。對于先兆子宮破裂，

32、應立即停止使用各種宮縮劑，必要時可進行全麻，以使子宮松弛。</p><p>　　1.3 立題依據(jù)和目的</p><p>　　縮宮素為一種多肽激素，自20世紀50年代合成純化的縮宮素后，一直被廣泛應用于臨床，尤其在引產(chǎn)或催產(chǎn)中有著重要的使用價值，為產(chǎn)科必備藥，所以縮宮素需求量巨大?？s宮素目前主要開發(fā)的品種為注射劑，主要用于引產(chǎn)、催產(chǎn)、產(chǎn)后及流產(chǎn)后因宮縮無力或縮復不良而引起的子宮出血。

33、我公司現(xiàn)有縮宮素注射液（1ml:10單位）；注射用縮宮素（5單位、10單位），需要用到大量的縮宮素溶液，購買原料已經(jīng)不能滿足需要，所以現(xiàn)在擬仿制縮宮素溶液，用于滿足生產(chǎn)需要。</p><p>　　1.3.1 有關本品的研究開發(fā)、生產(chǎn)、銷售及臨床應用情況的概述：</p><p>　　縮宮素是1920年從動物垂體后葉分離提純的一種多肽激素。1953年人工合成了縮宮素，它是人類第一個合成的多肽激

34、素?，F(xiàn)在已經(jīng)明確，幾種動物源性縮宮素的氨基酸組成和結構與人體的完全相同。醫(yī)藥上應用的縮宮素有兩種，一種是垂體后葉提取得到的制劑，另一種由化學合成法生產(chǎn)的。比較兩種方法，我公司將采用化學合成法生產(chǎn)縮宮素，因為化學合成法合成的縮宮素純度較高，而天然縮宮素由于含有少量加壓素，不太容易達到標準要求。</p><p>　　在國內(nèi)，共有5家單位生產(chǎn)縮宮素溶液，他們分別為上海第一生化藥業(yè)有限公司；寧波人健藥業(yè)有限公司；安徽豐原

35、藥業(yè)股份有限公司馬鞍山藥廠；浙江尖峰藥業(yè)有限公司；深圳市翰宇藥業(yè)有限公司。</p><p>　　縮宮素作為子宮收縮藥，臨床上主要用于引產(chǎn)、催產(chǎn)、產(chǎn)后及流產(chǎn)后因宮縮無力或縮復不良而引起的子宮出血。</p><p>　　本品臨床應用時有注射用縮宮素和縮宮素注射液兩種劑型。引產(chǎn)或催產(chǎn)時的用法用量為靜脈滴注，一次2.5～5單位，用氯化鈉注射液稀釋至每1ml中含有0.01單位。靜脈開始時每分鐘不超過

36、0.001～0.002單位，每15～30分鐘增加0.001～0.002單位，至達到宮縮與正常分娩期相似，最快每分鐘不超過0.02單位，通常為每分鐘0.002～0.005單位?？刂飘a(chǎn)后出血的用法用量為每分鐘靜滴0.02～0.04單位，胎盤排出后可肌肉注射5～10單位。本品偶有惡心、嘔吐、心率加快或心率失常的不良反應。</p><p>　　縮宮素用于過期妊娠及妊娠中斷的引產(chǎn)時，成功率一般為90％?？s宮素作催生用途時，

37、主要用于原發(fā)性或繼發(fā)性宮縮乏力者。一般催產(chǎn)成功率為98％。吳堅、周漫天報道過湖南省株洲化工集團公司醫(yī)院進行了縮宮素治療藥物流產(chǎn)后出血臨床觀察的研究，結果治療組治愈率達77.8%，總有效率93.83%。</p><p>　　1.3.2 知識產(chǎn)權情況</p><p>　　縮宮素溶液為已有國家標準的藥品，縮宮素溶液收載于地標升國標第9冊，標準號為WS-10001-（HD-0903）-2002。

38、經(jīng)檢索，本品的原料無專利保護，因此，開發(fā)本品無知識產(chǎn)權問題。</p><p>　　1.4 藥理毒理研究資料綜述</p><p>　　1.4.1 藥代動力學</p><p>　　本藥口服易被胰蛋白酶、胱氨酸氨基肽酶、縮宮素酶破壞失效，故多采用肌注、靜注或粘膜給藥。后一給藥途徑，作用較弱，主要用于產(chǎn)后止血或子宮復舊。肌注吸收良好，在3-5min起效，維持20-30min

39、, t1/2為5-12min。靜注立即起效，15-60min內(nèi)子宮收縮頻率與強度逐漸增加，然后穩(wěn)定。滴注完畢20min其效應逐漸減退。t1/2為1-6min。本藥大部分經(jīng)肝及腎迅速破壞，少部分以結合型由尿排出。</p><p>　　1.4.2縮宮素的生理作用</p><p>　　縮宮素對子宮平滑肌和乳腺有強大的選擇性的興奮作用，因而可以推論這種多肽在這些部位具有一種真正的激素作用?？s宮素引

40、起的子宮底收縮與妊娠后期和自然分娩期的子宮底收縮，在振幅、持續(xù)時間和頻率上均無明顯區(qū)別。然而內(nèi)源性縮宮素在分娩開始之間的直接關系尚難于肯定。雖然已經(jīng)清楚來自子宮頸、陰道或乳房適當?shù)母杏X刺激可以反射性地引起垂體后葉釋放縮宮素，但分娩開始時血漿縮宮素的濃度未見升高，然而，子宮對縮宮素的敏感性隨妊娠時間的延長而增加，這種調節(jié)人類分娩可能是重要的。這種學說與在相應時間里觀察到的在大鼠子宮肌上的縮宮素受體數(shù)明顯增加的現(xiàn)象是一致的。雖尚未證明完全沒

41、有縮宮素時分娩和哺乳就不能發(fā)生，但是已發(fā)現(xiàn)，縮宮素完全缺乏時，分娩延長，射乳反射消失，已知由縮宮素釋放而造成對象畜子宮的興奮作用有利于精子的上行，在人類生殖道內(nèi)是否有此種作用尚未肯定，至少可以認為，縮宮素對分娩起有利作用，對射乳、反射起著重要作用，它對男性有何作用尚不清楚。</p><p>　　1.4.3藥理作用和給藥方式</p><p>　　1.4.3.1興奮子宮 縮宮素的主要作用是

42、直接加強子宮平滑肌的收縮，其收縮強度與性質明顯受用藥劑量與女性激素的影響，小劑量就能增強妊娠末期子宮的節(jié)律性收縮，隨劑量增加，張力也增高，更大劑量（10u）則能引起強直性收縮。子宮對縮宮素的反應大致與子宮自發(fā)活動增加平行，雌激素能增加子宮對縮宮素的敏感性，而孕激素則能降低其敏感性，妊娠初期由于孕激素水平高，故子宮對縮宮素無反應，妊娠后期則因雌激素/孕激素的比值上升，使敏感性妊娠中期增強八倍，臨產(chǎn)子宮最為敏感，產(chǎn)后有逐漸下降。在大白鼠體內(nèi)

43、已觀察到妊娠末期子宮肌層的縮宮素受體有明顯增加?？s宮素與平滑肌上的受體結合時，改變受體的構型，啟動細胞膜上的離子通道開放，發(fā)生相關離子的跨膜運動，使膜去極化并發(fā)出動作電位。膜的電興奮使細胞膜Ca-Mg-ATP酶的活性受到抑制，鈣泵的運轉受阻，Ca通道的開放，使細胞內(nèi)游離Ca離子濃度急劇上升，游離Ca離子結合細胞肌絲上的特異位點后，激活肌凝蛋白輕鏈激酶，造成肌絲的相對滑動而引起肌細胞的收縮?？s宮素與蛻膜上的受體結合，受體刺激PGF2α產(chǎn)生

44、的藕聯(lián)作用是引起有效分娩的關鍵一環(huán)。 PGF2α能加強和維持縮宮素引產(chǎn)的</p><p>　　靜滴縮宮素3-5分鐘后，即出現(xiàn)子宮興奮作用，由于很快被血漿中縮宮酸氨滅活，故維持時間短暫（20-30）分鐘，對子宮體的興奮作用強，對子宮頸的興奮弱，用量適當不會引起強直性收縮，這些特點不同于麥角新堿，是用于催產(chǎn)、引產(chǎn)安全有效的重要依據(jù)。</p><p>　　1.4.3.2促進排乳 乳腺的小泡

45、分支被變形的平滑肌網(wǎng)即肌上皮所包圍，這些細胞收縮迫使乳汁從小泡管道進入大竇，由此嬰兒容易吸出乳汁，這種功能叫射乳。肌上皮對縮宮素呈高度的反應性，雖然兒茶酚氨抑制射乳，然并不認為肌上皮收縮依賴自主神經(jīng)支配，但認為它是受縮宮素和引起激素釋放的反射途徑所控制，縮宮素能使乳腺導管收縮，促使乳汁排出，產(chǎn)后乳房漲痛，用縮宮素滴鼻有一定療效。</p><p>　　1.4.3.3對心血管系統(tǒng)的作用 給人大量應用縮宮素，有明顯

46、而短暫的直接松弛血管平滑肌的作用，收縮壓與舒張壓均下降，尤以舒張壓下降更為突出，皮膚潮紅以及肢體血流增加，降壓時反射性的引起心動過速和心輸出量增加，當連續(xù)的以大劑量輸入時，血壓短暫下降后，繼之輕度而更為持久的升高。例如，與神經(jīng)節(jié)阻滯劑或交感神經(jīng)阻滯劑合用時，由于減弱了緩沖反射活性，以致降壓作用更顯著。由于產(chǎn)科多應用小劑量縮宮素，一般不出現(xiàn)明顯的血壓變化，但是大劑量縮宮素用于治療性流產(chǎn)或子宮外科手術時，特別在深度麻醉的病人，可使動脈血壓明

47、顯下降。</p><p>　　縮宮素的擴張血管作用與自主神經(jīng)受體無關，輸入生理劑量范圍的縮宮素時可顯著增加狗的腎血流量（尤其是切除垂體的狗）。</p><p>　　1.4.3.4給藥方式: 傳統(tǒng)的持續(xù)性靜脈滴注縮宮素引產(chǎn)， 血藥濃度一般經(jīng)過 20 ～ 30 分鐘才能達到穩(wěn)定狀態(tài)， 用藥是否有效， 必須等待30 分鐘才能肯定， 劑量大小不易發(fā)動宮縮， 劑量過大易引起子宮強直性收縮及胎兒窘迫，

48、 甚至子宮破裂 文獻報道， 從用藥到規(guī)律所需時間一般 90 ～ 120分鐘， 縮宮素達到有效濃度后持續(xù)在高水平上， 不利于子宮肌細胞的舒張 但該方法簡便易行， 而且已有廣泛應用的經(jīng)驗通過對縮宮素藥代動力學 受體活性和臨床資料分析認為， 縮宮素輸注時劑量增加的間隔必須在 20 ～ 40 分鐘， 也有人認為間隔時間可短至15 分鐘或長至60 分鐘由于體內(nèi)縮宮素以脈沖或間歇方式釋放， 又有已結合的縮宮素受體對未結合縮宮素的暫時性失活等因素，

49、使脈沖給藥方式越來越受到重視 在應用縮宮素引產(chǎn)和增強產(chǎn)力的研究中觀察到， 脈沖給藥效果與持續(xù)性輸注給藥效果相同， 甚或更佳， 并可降低新生兒高膽紅素血癥的發(fā)生率， 而且減少縮宮素用量 但需脈沖式輸注泵等， 尚未廣泛應用， 有待于進一步探討為預防過強宮縮所致胎死宮內(nèi)或子宮破裂的發(fā)生， 引產(chǎn)時不宜行縮宮素肌肉注射穴位注射或黏膜給藥 因</p><p>　　1.4.3.5其他作用 給實驗動物靜脈注射縮宮素，雖然通常

50、能看到促進鈉的排泄，但給予人時，自腎排出的電解質卻無預期的改變，因治療目的需大量應用縮宮素時，由于此激素有輕度的內(nèi)源性抗利尿激素樣作用，從而引起泌尿減少，在此用藥期間，由于過量的靜脈輸液，可以見到水中毒征候，除子宮、血管和乳腺肌上皮外，其他組織和平滑肌對縮宮素不敏感。在實驗研究中，縮宮素與加壓素相似，高濃度時對許多與激素原發(fā)作用無明顯關系的組織可產(chǎn)生作用。 </p><p>　　1.4.4藥物相互作用</p

51、><p>　　1.4.4.1 環(huán)丙烷等碳氫化合物吸入全麻時，使用縮宮素可導致產(chǎn)婦出現(xiàn)低血壓，竇性心動過緩或（和）房室節(jié)律失常。恩氟烷濃度＞1.5﹪，氟烷濃度＞1.0﹪吸入全麻時，子宮對縮宮素的效應減弱。恩氟烷濃度＞3.0﹪可消除反應，并可導致子宮出血。</p><p>　　1.4.4.2 其他宮縮藥與縮宮素同時用，可使子宮張力過高，產(chǎn)生子宮破裂或（和）宮頸撕裂。</p><

52、p><b>　　第二章 實驗部分</b></p><p>　　本品為化學合成九肽，收載于《化學藥品地方標準上升國家標準（第9冊）》，標準號為WS-10001-(HD-0903)-2002，根據(jù)國家食品藥品監(jiān)督管理局《藥品注冊管理辦法》，本品屬化學藥品注冊分類-6。參照縮宮素溶液質量標準和《中國藥典》2005年版二部的有關規(guī)定，對本品的相關質量進行了研究工作。</p>&l

53、t;p>　　對照品來源及批號：合成縮宮素：批號為1229-9601，中國藥品生物制品檢定所；垂體后葉：批號為502-8709，中國藥品生物制品檢定所。</p><p>　　樣品來源：南京新百藥業(yè)有限公司；批號：120307，120310，120314</p><p>　　市售樣品：縮宮素溶液；批號：120104（寧波人健藥業(yè)有限公司）</p><p><

54、b>　　2.1效價限度</b></p><p>　　根據(jù)本品三批樣品效價檢測結果及縮宮素溶液國家藥品標準WS-10001-(HD-0903)-2002，將本品的效價限度訂為：每1ml含縮宮素的效價不得少于150單位。</p><p><b>　　2.2性狀</b></p><p>　　目測檢視，本品三批樣品和市售樣品性狀檢查的

55、結果如下：</p><p>　　表2-1性狀檢查結果</p><p>　　結果表明：目測觀察本品三批樣品和市售樣品，其性狀均為無色澄明液體。</p><p><b>　　2.3鑒別</b></p><p>　　參照國家藥品監(jiān)督管理局國家藥品標準WS-10001-(HD-0903)-2002進行鑒別。</p>

56、<p>　　2.3.1生物測定法鑒別</p><p>　　方法：照縮宮素生物測定法（中國藥典2005年版二部附錄Ⅻ F）測定，應有子宮收縮反應。</p><p>　　本法系比較垂體后葉或合成縮宮素標準品（S）與供試品（T）引起離體大鼠子宮收縮的作用，以測定供試品的效價。</p><p>　　標準品溶液的配制：迅速精密稱取垂體后葉標準品適量，注意避免吸潮，

57、先加少量0.25%醋酸溶液，仔細研磨，移置硬質大試管中，再精密加0.25%醋酸溶液使成每1ml中含縮宮素1單位的溶液。管口輕放一玻璃塞，浸入沸騰的水中，時時振搖，加熱煮沸5分鐘取出，迅速冷卻，濾過，濾液分裝于適宜的容器內(nèi)，4～8℃貯存，如無沉淀析出，可在3個月內(nèi)使用。</p><p>　　標準品稀釋液的配制：試驗當日，精密量取垂體后葉標準品溶液適量或取合成縮宮素標準品，按標示效價加入0.9%氯化鈉溶液配成每1ml

58、中含縮宮素1單位的溶液，按高低劑量組（ds2，ds1）加0.9%氯化鈉溶液配成兩種濃度的稀釋液，一般高濃度稀釋液可配成每1ml中含0.01～0.02單位，高低劑量的比值（r）一般不得大于1:0.7。調節(jié)劑量使低劑量能引起子宮收縮，一般在20～50mm；高劑量應不致使子宮收縮達到極限，記錄儀指針一般為50～85mm，且高低劑量所致子宮的收縮應有明顯差別。</p><p>　　供試品溶液與稀釋液的配制：按供試品的標示

59、量或估計效價（AT），照標準品溶液與其稀釋液的配制法配成，高低兩種濃度的稀釋液，其比值（r）應與標準品相等，供試品和標準品高低劑量所致的反應均值應相近。</p><p>　　子宮肌蓄養(yǎng)液的配制：試驗當日，取氯化鈉9g、氯化鉀0.42g、氯化鈣（按無水物計算）0.06g與葡萄糖0.5g，加水700ml使溶解，另取碳酸氫鈉0.5g，加水約200ml溶解后，緩緩傾注于前一溶液中，隨加隨攪拌，最后加水適量使成1000ml

60、。</p><p>　　供試用動物：取健康合格的成年雌性大鼠，斷乳后即與雄鼠隔離，出生后不超過3個月，體重160～240g。試驗當日，選擇陰道涂片在動情前期的動物，也可用雌性激素處理使子宮涂片為動情前期或動情期的動物。</p><p>　　測定法：取選定的大鼠迅速處死，剖腹取出子宮，仔細分離附在子宮肌上的結締組織，注意避免因牽拉使子宮肌受損。在子宮分叉處剪下左右2條，取一條將其下端固定于離

61、體器官恒溫水浴裝置的浴杯底部，上端用線與記錄裝置相連，以描記子宮收縮；浴杯中加入一定量的子宮肌蓄養(yǎng)液（約30～50ml），連續(xù)通入適量空氣。蓄養(yǎng)液應調節(jié)至32～35℃之間并保持恒溫（±0.5℃），子宮放入浴杯后，靜置約15分鐘，按次序準確注入等體積的標準品或供試品兩種濃度的稀釋液（0.3～0.8ml），待子宮肌收縮至最高點開始松馳時（約60～90秒鐘），放去蓄養(yǎng)液并用蓄養(yǎng)液洗滌一次，再加入等量蓄養(yǎng)液，靜置；相鄰兩次給藥的間隔時

62、間應相等（約3～5分鐘），每次給藥應在前一次反應恢復穩(wěn)定以后進行。標準品稀釋液和供試品稀釋液各取高低兩個劑量（ds2、ds1、dT2、dT1）為一組，按隨機區(qū)組設計的次序輪流注入每組4個劑量，重復4～6組。測量各劑量所致子宮收縮的高度，照生物檢定統(tǒng)計法（附錄Ⅱ-ⅩⅣ）中的量反應平行線測定法計算效價及實驗誤差。</p><p>　　本法的可信限率FL（%）不得大于10%。</p><p>　

63、　另取空白試劑，同法試驗。三批樣品及市售品鑒別結果見表2-2。</p><p>　　表2-2生物測定法鑒別結果</p><p>　　結果表明：本品三批樣品和市售樣品均呈正反應，空白試劑無干擾。本方法可以用以鑒別本品。</p><p>　　2.3.2高效液相法保留時間鑒別</p><p>　　方法：取本品，加氯化鈉注射液稀釋成每1ml中含5個單

64、位或10個單位的溶液，作為供試品溶液；另取合成縮宮素標準品適量，同法配制，作為標準品溶液。照高效液相色譜法（中國藥典2005年版二部附錄Ⅴ D），用辛基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以0.1mol/L磷酸二氫鈉溶液-乙腈（82∶18）為流動相；流速為每分鐘0.8 ml；檢測波長為220nm。取標準品溶液和供試品溶液各20μl，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖，供試品主峰和標準品主峰的保留時間一致。另取空白試劑，同法試驗。三批樣品及市售品鑒別結果見

65、表2-3及圖2-1~2-6。</p><p>　　表2-3高效液相保留時間鑒別結果</p><p>　　結果表明：本品三批樣品和市售樣品按上述方法檢測，結果均符合規(guī)定，空白試劑無干擾。</p><p><b>　　2-4檢查</b></p><p><b>　　2.4.1pH值</b></p&

66、gt;<p>　　取本品適量，依法測定pH值（中國藥典2005年版二部附錄Ⅵ H）。</p><p>　　表2-4pH值檢查結果</p><p>　　結果表明：本品三批樣品和市售樣品的pH值均在3.0~4.0范圍內(nèi)，暫將本品的pH值限度定為3.0~4.0。</p><p>　　2.4.2氨基酸比值</p><p><b&g

67、t;　?。?）色譜條件</b></p><p>　　儀器：HP（惠普）1050型液相色譜儀</p><p>　　色譜柱：Hypersil BDS（150×4.6mm）大連依利特</p><p>　　流動相：A相：20mmol/L乙酸鈉，0.02%三乙胺，0.3%四氫呋喃，用15%磷酸調pH7.2</p><p>　　B相

68、：100mmol/L乙酸鈉∶甲醇∶乙腈（200∶450∶350）</p><p>　　流速：1ml/min</p><p>　　梯度：0→27min B：0→60%</p><p>　　28.5 min 100%</p><p>　　30 min 100%</p>

69、;<p>　　檢測波長：0→25 min 338nm</p><p>　　25→30min 262 nm</p><p>　　（2）氨基酸對照品：濃度為1nmol/μl</p><p>　　Cys- Cys，Tyr，Ile，Leu，Asp，Glu，Gly，Pro，（HP公司出品）</p><p>　?。?/p>

70、3）測定原理 鄰苯二甲醛—氯甲酸芴甲酯全自動柱前衍生化，C18柱反相分離；利用氨基酸對照品外標法進行定性、定量計算。</p><p>　?。?）測定 取本品3ml，置硬質安瓿中，加鹽酸3ml，搖勻，減壓封口，置110℃加熱20小時，冷卻，啟封，轉移至蒸發(fā)皿中，蒸發(fā)至干，加0.02mol/L鹽酸溶液10ml使殘留物溶解，作為供試品溶液。準確吸取供試品溶液1μl，分別加硼酸緩沖液（0.4mol/L，pH10.4）

71、5μl，鄰苯二甲醛1μl，氯甲酸芴甲酯1μl，進行衍生化，注入液相色譜儀，分離測定。另取天冬氨酸、谷氨酸、脯氨酸、甘氨酸、亮氨酸、酪氨酸、異亮氨酸和半胱氨酸對照品適量，加0.02mol/L鹽酸溶液制成每1ml中約含各氨基酸0.2μmol的溶液，作為對照品溶液，同法測定。同時另取市售縮宮素溶液同法測定，結果見表2-5及圖2-7~2-11。</p><p>　　表2-5氨基酸比值檢查結果</p><

72、;p>　　結果表明：三批樣品中各氨基酸的比值：天冬氨酸、谷氨酸、脯氨酸、甘氨酸均為0.95~1.05；亮氨酸、異亮氨酸均為0.90~1.10；酪氨酸均為0.7~1.05；半胱氨酸均為1.4~2.1。本品氨基酸比值與市售樣品相差不大。</p><p><b>　　2.4.3升壓物質</b></p><p>　　取本品適量，用氯化鈉注射液稀釋成每1ml中2個單位的溶

73、液，依法檢查（中國要藥典2005年版二部附錄Ⅺ F），每10單位縮宮素溶液中的升壓物質不得過0.5單位。</p><p>　　表2-6升壓物質檢查結果</p><p>　　結果表明：三批樣品及市售樣品升壓物質檢查結果均符合規(guī)定。</p><p>　　2.4.4細菌內(nèi)毒素</p><p>　　取本品，依法檢查（中國要藥典2005年版二部附錄Ⅺ

74、E），每1單位縮宮素中含內(nèi)毒素的量應不得過0.5EU，檢查結果見下表</p><p>　　表2-7細菌內(nèi)毒素檢查結果</p><p>　　結果表明：三批樣品及市售樣品細菌內(nèi)毒素檢查結果均符合規(guī)定。</p><p><b>　　2.5效價測定</b></p><p>　　2.5.1儀器設備（見表2-8）</p>

75、<p>　　表2-8 主要實驗儀器表</p><p>　　Table 2-8 Experiment instruments</p><p>　　2.5.2測定方法 </p><p>　　參照國家藥品監(jiān)督管理局國家藥品標準WS-10001-(HD-0903)-20</p><p>　　02縮宮素溶液效價測定的方法，采用縮宮素生物

76、測定法（中國藥典2005年版二部附錄Ⅻ F）測定。</p><p>　　本法系比較垂體后葉或合成縮宮素標準品（S）與供試品（T）引起離體大鼠子宮收縮的作用，以測定供試品的效價。</p><p>　　標準品溶液的配制：迅速精密稱取垂體后葉標準品適量，避免吸潮，先加少量0.25%醋酸溶液，仔細研磨，移置硬質大試管中，再精密加0.25%醋酸溶液使成每1ml中含縮宮素1單位的溶液。管口輕放一玻璃塞

77、，浸入沸騰的水中，時時振搖，加熱煮沸5分鐘取出，迅速冷卻，濾過，濾液分裝于1ml潔凈的安瓿中，熔封，4 ~8℃貯存，如無沉淀析出，可在3個月內(nèi)使用。</p><p>　　標準品稀釋液的配制：試驗當日，精密量取垂體后葉標準品溶液適量或取合成縮宮素標準品，按標示效價加0.9%氯化鈉溶液配成每1ml中含縮宮素1單位的溶液，按高低劑量組（ds2、ds1）加0.9%氯化鈉溶液配成兩種濃度的稀釋液，一般高濃度稀釋液可配成每1

78、ml中含0.01~0.02單位，高低劑量的比值（r）一般不得大于1∶0.7。調節(jié)劑量使低劑量能引起子宮收縮，記錄儀指針一般在20~50mm；高劑量應不致使子宮收縮達到極限，記錄儀指針一般在50~85mm，且高低劑量所致子宮的收縮應有明顯的差別。</p><p>　　供試品溶液與稀釋液的配制：按供試品的標示量或估計效價（AT），照標準品溶液與其稀釋液的配制法配制，高低兩種濃度的稀釋液，其比值（r）應與標準品相等，供

79、試品和標準品高低劑量所致的反應均值應相近。</p><p>　　子宮蓄養(yǎng)液的配制：試驗當日，取氯化鈉9g、氯化鉀0.42g、氯化鈣（按無水物計算）0.06g與葡萄糖0.5g，加水700ml使溶解，另取碳酸氫鈉0.5g，加水約200ml溶解后，緩緩傾注于前一溶液中，隨加隨攪拌，最后加水適量使成1000ml。</p><p>　　供試用動物：取健康合格的成年雌性大鼠，斷乳后即與雄鼠隔離，出生后

80、不超過3個月，體重160~240g。試驗當日，選擇陰道涂片在動情前期的動物，也可用雌性激素處理使子宮涂片為動情前期或動情期的動物。</p><p>　　測定法：取選定的大鼠迅速處死，剖服取出子宮，仔細分離附在子宮肌上的結締組織，注意避免因牽拉使子宮肌受損。在子宮分叉處剪下左右2條，取一條將其下端固定于離體器官恒溫水浴裝置的浴杯底部。上端用線與記錄裝置相連，以描記子宮收縮；浴杯中加入一定量的子宮肌蓄養(yǎng)液（約30~5

81、0ml），連續(xù)通入適量空氣。蓄養(yǎng)液應調節(jié)至32~35℃并保持恒溫（±0.5℃），子宮放入浴杯后，靜置約15分鐘，按次序準確注入等體積的標準品和供試品兩種濃度的稀釋液（0.3~0.8ml），待子宮肌收縮至最高點開始松弛時（約60~90秒鐘），放去蓄養(yǎng)液并用蓄養(yǎng)液洗滌一次，再加入等量蓄養(yǎng)液，靜置；相鄰兩次給藥的間隔時間應相等（約3~5分鐘），每次給藥應在前一次反應恢復穩(wěn)定以后進行。標準品稀釋液和供試品稀釋液各取高低兩個劑量（ds2

82、、ds1、dT2、dT1） 為一組，按隨機區(qū)組設計的次序輪流注入每組4個劑量，重復4~6組。測量各劑量所致子宮收縮的高度，照生物檢定統(tǒng)計法（附錄XIV）中的量反應平行線測定法計算效價及實驗誤差。</p><p>　　本法的可信限率FL（%）不得大于10%。</p><p>　　2.5.3方法學考察</p><p><b>　?。?）重復性</b>

83、;</p><p>　　取120307批樣品，照效價測定法平行配制六份樣品，測定樣品效價，考察該效價測定方法的重復性，結果見下表。</p><p>　　表2-9重復性試驗結果</p><p>　　結果表明：采用本法對同批樣品平行試驗六份，六次效價測定結果的RSD= 0.70 %，本方法重復性較好。</p><p><b>　　（2）

84、中間精密度</b></p><p>　　取120307、120310、120314批樣品，分別于不同時間、不同儀器，由不同的操作者試驗，照前述效價測定方法依法測定樣品效價，結果見下表。</p><p>　　表2-10中間精密度試驗結果</p><p>　　結果表明：本品效價測定方法的中間精密度較好，準確可靠。</p><p>　　

85、（3）溶液穩(wěn)定性試驗</p><p>　　取120307批樣品，照效價測定法配制樣品，分別于0、2、4、6小時測定效價，考察溶液的穩(wěn)定性，結果見下表。</p><p>　　表2-11溶液穩(wěn)定性試驗結果</p><p>　　結果表明：樣品溶液在6小時內(nèi)穩(wěn)定，適合常規(guī)測定。</p><p>　　2.5.4樣品效價測定結果</p>&

86、lt;p>　　取本品連續(xù)試制的三批樣品，采用縮宮素生物測定法測定縮宮素溶液的效價，結果如下表所示。</p><p>　　表2-12三批樣品的效價測定結果</p><p>　　以上的研究結果表明，采用所選定的縮宮素生物測定法，能夠準確測定本品的效價。</p><p><b>　　2.6結論</b></p><p>　

87、　通過以上試驗對本品的性狀、鑒別、檢查、效價測定等方面進行研究，本品的質量符合國家藥典的規(guī)定，可以對外銷售。</p><p><b>　　總結</b></p><p>　　通過以上試驗對本品的性狀、鑒別、檢查、效價測定等方面進行研究，確定縮宮素生物測定法為本品效價的測定方法，本法具有簡便、準確等優(yōu)點。在本研究基礎上，質量標準可控制本品的質量。</p>&

88、lt;p><b>　　參考文獻</b></p><p>　　[1] 李曉紅：催產(chǎn)素臨床應用特點 中國鄉(xiāng)村醫(yī)生雜志[J] 1989,11:3-4</p><p>　　[2] 吳堅、周漫天：縮宮素治療藥物流產(chǎn)后出血臨床觀察 中國醫(yī)師雜志[J] 2004,1(6):127</p><p>　　[3] 孫云、鞏淑娟、劉翠芝：縮宮素在產(chǎn)程中的應用

89、中國現(xiàn)代婦產(chǎn)科學雜志[J] 2005,4(2):345</p><p>　　[4] Cassoni, P., Fulcheri, E., Carcangiu, M. L., Stella, A., Deaglio, S. & Bussolati, G. (2000) J. Pathol. 190, 470–477.</p><p>　　[5 ]Ohmichi, M., Koike,

90、 K., Nohara, A., Kanda, Y., Sakamoto, Y., Zhang, Z. X., Hirota, K. & Miyake, A. (1995) Endocrinology 136, 2082–2087.</p><p>　　[6 ]Martens, H., Kecha, O., Charlet-Renard, C., Defresne, M. P. & Geenen,

91、 V. (1998) Neuroendocrinology 67, 282–289.</p><p>　　[7] Geenen, V., Kecha, O., Brilot, F., Charlet-Renard, C. & Martens, H. (1999)Neuroimmunomodulation 6, 115–125.</p><p>　　[8] 全國孕產(chǎn)婦死亡調查協(xié)作組：

92、 全國 21省市自治區(qū)孕產(chǎn)婦死亡率及死因分析 中華婦產(chǎn)科雜志[J], 1991, 26( 1) : 2 </p><p>　　[9] 劉彩霞. 刺激乳頭對產(chǎn)后出血的影響： 中國實用婦科與產(chǎn)科雜志[J], 1993, 9( 4) : 211 </p><p>　　[10] Cassoni, P., Sapino, A., Munaron, L., Deaglio, S., Chini, B.

93、, Graziani, A.,Ahmed, A. & Bussolati, G. (2001) Endocrinology 142, 1130–1136.</p><p>　　[11] Breton, C., Haenggeli, C., Barberis, C., Heitz, F., Bader, C. R., Bernheim, L.& Tribollet, E. (2002) J. Cli

94、n. Endocrinol. Metab. 87, 1415–1418.</p><p><b>　　致 謝</b></p><p>　　本論文是在蔡恒老師的親切關懷和悉心指導下完成的，他嚴謹?shù)闹螌W態(tài)度，高效靈活的工作方法，以及平易近人、和藹可親的生活作風，都給我以深刻的影響，使我受益匪淺，在此表示衷心的感謝!</p><p>　　在實驗過程

95、中，還得到了沈飛和其他研發(fā)部人員的指導和幫助，在此深表感謝!</p><p>　　在順利完成大學本科學業(yè)之時，向所有關心、幫助和培養(yǎng)我的南京工業(yè)大學藥學院的老師致以深深的謝意和衷心的祝福!</p><p>　　最后，特別感謝我的家人!是他們無私的支持才有我今天的學習機會！</p><p><b>　　臧力</b></p><