表型無球少球懸鈴木優(yōu)良單株遺傳變異的ISSR及SSR分析.pdf

1、懸鈴木是世界著名的行道樹及園林綠化樹種，但是懸鈴木產(chǎn)生大量的果毛，不僅給人們的生活帶來極大的不便，而且有對人類的身體健康產(chǎn)生危害。為了解決懸鈴木果毛問題，對懸鈴木從表型變異、跟蹤觀察上進行了研究選育，但是目前在分子水平上的研究比較少。與傳統(tǒng)的形態(tài)學(xué)、孢粉學(xué)和同工酶鑒定方法相比，分子標記技術(shù)快速準確、多態(tài)性高，直接以DNA形式表現(xiàn)出來，不受外界環(huán)境、組織類別、發(fā)育時期等條件的影響。本實驗采用ISSR及SSR分子標記對從自然界選育的無球少球

2、單株及其插穗、接穗、砧木為材料，從不同的方面入手，對其進行遺傳變異分析，為獲得可以穩(wěn)定遺傳的無球品種提供依據(jù)，并為優(yōu)良單株的推廣提供依據(jù)。取得的試驗結(jié)果主要如下:
　　(1)本試驗在傳統(tǒng)CTAB方法的基礎(chǔ)上，對其加以改良，然后用改良的方法提取懸鈴木葉片DNA，然后對DNA質(zhì)量進行檢測，結(jié)果顯示，改良的CTAB方法適合提取高質(zhì)量的懸鈴木基因組DNA。
　　(2)本試驗采用ISSR分子標記方法對14株表型無球少球的懸鈴木優(yōu)良單株

3、進行研究，從分子水平上分析它們之間的遺傳變異關(guān)系，進而選育無球、少球懸鈴木。結(jié)果為:篩選出18個適合懸鈴木的ISSR引物，并應(yīng)用其中的11個引物進行分析;11個引物擴增出條帶總數(shù)105條清晰、穩(wěn)定、多態(tài)性好的可重復(fù)條帶，不同引物擴增條帶數(shù)變幅為6-12條，平均每個引物擴增出9.6條帶，99條具有多態(tài)性，多態(tài)性比率為93.84％，平均每個引物產(chǎn)生9條多態(tài)性帶，多態(tài)性比例變化范圍81.82％-100.00％;聚類時在0.67處可將14個單株

4、分為5個組，根據(jù)課題組多年對懸鈴木表型的跟蹤觀察及其他方法試驗，暫定6號為無球懸鈴，1、2、3、13號為少球懸鈴木。
　　(3)本試驗以懸鈴木單株及其接穗、插穗，還有砧木材料進行研究材料進行了ISSR標記研究，結(jié)果為:應(yīng)用篩選出的18個引物中的13個引物進行ISSR擴增，結(jié)果顯示12個懸鈴木單株之間的多態(tài)性較高，達82.35％;將三組材料分別聚類分析，第一組材料顯示懸鈴木的插穗與母株沒有遺傳差異，接穗與母株之間有小程度的遺傳差異;

5、而第二組第三組材料顯示插穗、接穗均與母株之間有遺傳差異。根據(jù)以上三組材料結(jié)果，大致可以推測:懸鈴木的接穗、插穗與母株之間均有遺傳變異，接穗的變異程度大一些。
　　(4)本試驗以懸鈴木單株及其接穗、插穗，還有砧木材料進行SSR標記分析，其結(jié)果為:通過反復(fù)篩選，共篩選出10對適合懸鈴木擴增的SSR引物;10對引物對懸鈴木進行擴增，10對引物擴增出36條帶，各對引物條帶變化范圍為2-5個，各引物多態(tài)性比率分布于66.7％-100.0％，