1487.鐵皮石斛qpcr內(nèi)參基因的篩選及開花相關(guān)基因的表達分析

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3、堿、菲類化合物等多種藥用成分，擁有生津益胃、潤肺止咳、增強免疫力等功效。對關(guān)鍵基因進行功能研究有助于更好地開發(fā)利用鐵皮石斛，基因的表達分析則是基因功能研究的一個重要方面。目前，基因表達量一般通過熒光定量PCR相對定量的方法進行分析，而穩(wěn)定的內(nèi)參基因是qPCR相對定量準(zhǔn)確的保障。為了研究鐵皮石斛不同組織中、不同生長階段中及非生物脅迫條件下的功能基因表達，篩選特定試驗條件下的最佳內(nèi)參基因或基因組合是十分必要的。本研究選取了7個常用的內(nèi)參基因

4、(Act／n、18SrRNA、GAPDH、EFla、TUA、TUB、UBQ)作為候選基因，通過qPCR絕對定量方法分別比較了鐵皮石斛不同組織中(原球莖、根、莖、葉、花、種子)、不同生長階段以及非生物脅迫條件下(高溫、低溫和干旱)各候選內(nèi)參基因的表達差異。隨即對獲得的數(shù)據(jù)采用三個內(nèi)參基因穩(wěn)定性評估軟件geNorm、NormFinder和BestKeeper進行分析，最終篩選到特定試驗條件下最合適的內(nèi)參基因和內(nèi)參基因數(shù)。在鐵皮石斛不同組織中

5、，geNorm與NormFinder軟件分析結(jié)果較為一致，而Bestkeeper軟件分析的結(jié)果與以上兩種軟件的分析結(jié)果存在差異。geNorm和NormFinder軟件分析得出候選內(nèi)參基因表達穩(wěn)定性最低者為18SrRNA，最高者為GAPDH。Bestkeeper軟件分析得出候選內(nèi)參基因表達穩(wěn)定性最低者為TUA，最高者為18SrRNA。此外，依據(jù)geNorm軟件的配對差異值Vn／n1，確定該試驗所需內(nèi)參基因的最佳數(shù)目是3。綜合分析，推薦鐵皮

6、石斛不同組織中最佳內(nèi)參基因組合為EFlaActinGAPDH。在鐵皮石斛不同生長發(fā)育階段，3個軟件的分析結(jié)果不盡相同，但3個軟件分析得出候選內(nèi)參基因表達穩(wěn)定性最低者均為TUB，結(jié)合geNorm軟件推薦的該試驗條件下所需內(nèi)參基因數(shù)目是5，同時考慮試驗成本和實際可行性，綜合推薦基因組合UBQG么PD日。在高溫(40℃)和低溫(4℃)脅迫條件下，geNorm和Bestkeeper軟件的分析結(jié)果較一致，與NormFinde軟件分析結(jié)果有所不同。

7、geNorm和Bestkeeper軟件分析均得出候選內(nèi)參基因表達穩(wěn)定性最低者為TUA，最高者為18SrRNA。NormFinder軟件分析得出候選內(nèi)參基因表達穩(wěn)定性最低者為GAPDH最高者為Actin。結(jié)合geNorm軟件推薦的該試驗條件下所需內(nèi)參基因是5，同時考慮試驗成本和實際可行性，綜合推薦基因組合為TUB18SrRNA。在干旱脅迫條件下，3個內(nèi)參基因穩(wěn)定性評估軟件的分析結(jié)果較一致。3個軟件分析均得出候選內(nèi)參基因表達穩(wěn)定性最低者為T