13890.利用植物油體蛋白系統(tǒng)表達神經保護肽humanin的研究

1、分類號Q2墨墨●UDC602學校代碼!壘塑三學校亡蘑太堂密級公玨彥商大學學位論文劐用植物油馇蛋自丕統(tǒng)麥鯊袖經堡控魃H些墮魚凸i旦的硒究專業(yè)名稱佳塑越蟄堂皇趲佳堂學院名稱壅堂院指導教師圃凰廷副塾拯申請學位級別亟論文提交日期圣Q!圣生墨旦論文答辯日期窒Q!圣生墨旦學位授予日期星Q!墨生魚月廣西大學碩士掌位論文利用植物油體蛋白系統(tǒng)表達神經保護肽Humanin的研究利用植物油體蛋白系統(tǒng)表達神經保護肽Humanin的研究摘要阿爾茨海默病(Alzh

2、eimersdisease，AD)是一種在老年人中常見的疾病，常伴有記憶力減退、遲鈍、癡呆等癥狀，其發(fā)病率和人口的老齡化成正比。此病嚴重影響了患者的正常生活，是于癌癥、中風和心腦血管疾病之后的又一類危害人類健康的重大疾病。Humanin蛋白對AD有關基因突變引起的細胞損傷具有保護作用，后來的研究認為，Humanin還具有更廣泛的藥用價值，是一種重要的藥用蛋白，市場需求潛力巨大。植物生物反應器是生產外源蛋白的有效方法，具有生產成本低，安全

3、性高等特點，人們已經利用植物生物反應器成功表達了酶和抗體等多種外源蛋白。作為生物反應器的一種，植物油體蛋白系統(tǒng)能夠在種子中高水平表達外源蛋白，具有親水親脂雙重特性，其中部疏水區(qū)高度保守，呈發(fā)夾結構鑲嵌在油體的內部，決定了在油體上的定位，而兩端堿基序列差異比較大，故外源蛋白插入其任何一端都對其在油體上的定位毫無影響，最重要的是融合蛋白容易分離純化。本研究利用花生油體蛋白系統(tǒng)表達Humanin蛋白，尋求新的植物生物反應器載體、優(yōu)化表達條件，

4、對農學、基因工程和生物制藥的研究具有重要意義。本研究初步建立了花生油體蛋白(oleosin)系統(tǒng)表達Humanin的技術體系，并在煙草種子中表達了Humanin蛋白，為在花生中生產Humanin蛋白奠定了基礎。主要研究內容和結果如下：Humanin基因的合成：設計并合成部分互補的兩條單鏈DNA引物(分別帶有相應的酶切位點和修飾序列)，經克隆測序得到Humanin基因的正確克隆。植物表達載體的構建：將Humanin基因連接在花生oleos

5、in基因的3’端，中間以腸肽酶編碼序列連接，分別以35S組成型啟動子和花生oleosin啟動子驅動表達，構建了pCAMBIA2300oleopromoterAholeosinHumanin和pCAMBIA2300—35S—AholeosinHumanin植物表達載體；將oleopromoterAholeosinHumanin表達單元構建到含有GUS的pCAMBIAl301載體中，得到了植物表達載體pCAMBIAl301oleopromo