RNA結(jié)合蛋白QKI抑制腎透明細胞癌演變的機制探究.pdf

1、腎細胞癌（renal cell carcinoma，RCC）簡稱腎癌，是起源于腎小管上皮的惡性腫瘤，占腎臟惡性腫瘤的80％-90%。腎癌約占成人惡性腫瘤的2%-3%，世界各國各地區(qū)腎癌的發(fā)病率差異明顯，發(fā)達國家發(fā)病率高于發(fā)展中國家,我國各地區(qū)腎癌的發(fā)病率及死亡率差異也較大。腎癌的病因未明。其發(fā)病與遺傳，吸煙，肥胖，高血壓等危險因素相關(guān)，遺傳性腎癌或家族性腎癌占腎癌總數(shù)的2%-4%。染色體3p25-26的VHL基因與腎透明細胞癌的發(fā)生有密

2、切關(guān)系。目前，腎癌的治療主要是手術(shù)，放化療，免疫治療和靶向治療，但是這些方法對于某些晚期和轉(zhuǎn)移性腎癌患者收效甚微。因此，我們急需要發(fā)現(xiàn)新的治療和診斷腎透明細胞癌的靶點，以達到早發(fā)現(xiàn)早治療的目的，從而延長患者的生存時限并且提高患者的生存質(zhì)量。
　　HIF-1α是低氧誘導(dǎo)因子HIF（hypoxia inducible factor）家族的一員，是由編碼紅細胞生成素的基因發(fā)現(xiàn)低氧調(diào)控區(qū)域 HRE而得來的。HIF-1α在低氧條件下與HIF

3、-1β結(jié)合形成異源二聚體并且轉(zhuǎn)移進入細胞核，從而調(diào)控下游靶基因表達。研究證實HIF-1α可促進多種腫瘤細胞增殖，轉(zhuǎn)移和血管生成。HIF是腎透明細胞癌中VHL信號通路的重要組成部分，其中HIF-1α過表達誘導(dǎo)的血管生成時腎透明細胞癌發(fā)生機制的重要環(huán)節(jié)并且導(dǎo)致較差的臨床治療效果。
　　RNA結(jié)合蛋白QKI是信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和激活家族（STAR家族）成員之一。qki基因可以編碼多種蛋白，主要有三種亞型QKI-5、QKI-6和QKI-7。以往的研

4、究表明QKI在神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育中發(fā)揮重要作用。我們實驗室的研究也表明，QKI促進了結(jié)腸上皮，巨噬細胞和肌肉細胞的分化過程。同時QKI在胃癌，前列腺癌和舌癌中還扮演著抑癌基因的角色。基于以上研究，本課題意在探討QKI在腎癌發(fā)生發(fā)展中的作用，能否作為診斷，治療和預(yù)后的潛在靶點。
　　目的：
　　1)利用腎透明細胞癌以及匹配的癌旁臨床組織樣本，檢測RNA結(jié)合蛋白QKI的表達量是否存在差異，同時在腫瘤細胞系和正常細胞中檢測QKI表達是否

5、存在差異。
　　2)觀察過表達和干涉QKI對腫瘤細胞增殖凋亡以及周期的影響
　　3)在上述功能變化的基礎(chǔ)上，進一步探索RNA結(jié)合蛋白QKI發(fā)揮上述作用的分子機制。
　　4)最后通過組織芯片技術(shù)收集腎透明細胞癌組織并進行免疫組化半定量和統(tǒng)計學(xué)分析，探討RNA結(jié)合蛋白QKI與患者的分級分期以及生存時間是否存在相關(guān)性。
　　方法和結(jié)果：
　　1)針對腎癌臨床樣本的免疫組織化學(xué)染色結(jié)果表明，QKI在腎透明細胞癌中的

6、表達量低于癌旁組織；并且QKI的表達水平與腎癌的惡性程度呈負相關(guān)：對腫瘤組織以及癌旁組織進行Western Blot檢測結(jié)果顯示，腎癌患者的癌旁組織中QKI的表達水平明顯高于腫瘤組織。同時，我們通過RT-PCR和Western Blot在細胞水平檢測QKI的表達，結(jié)果顯示QKI的表達趨勢與組織水平相一致。
　　2)MTT結(jié)果顯示，過表達QKI使786-0和Caki-1細胞增殖受到抑制；流式細胞術(shù)結(jié)果顯示，過表達QKI使786-0和

7、Caki-1細胞凋亡率增加。RT-PCR和Westernblot結(jié)果顯示過表達QKI使周期相關(guān)蛋白cyclinD1表達降低，而p27表達增高；流式細胞術(shù)結(jié)果顯示，過表達QKI后786-0和Caki-1腫瘤細胞中S期細胞比例降低。同時，干涉QKI后與過表達結(jié)果相反。
　　3)RT-PCR和Western Blot結(jié)果顯示，在低氧（5%）和常氧（20%）條件下，過表達QKI使低氧誘導(dǎo)因子HIF-1α表達均受到抑制; RT-PCR結(jié)果顯

8、示，在同樣的條件下，HIF-1α下游靶基因GLUT-1，VEGF，PGK-1表達同樣受到抑制；同時，在干涉QKI后得到與過表達結(jié)果相反。RT-PCR結(jié)果顯示，在過表達QKI的同時使用si-RNA-HIF-1α干涉掉HIF-1α后，其下游靶基因變化趨勢不再明顯。
　　4)對腎癌臨床樣本進行免疫組化染色，并對染色結(jié)果進行半定量分析，以25%陽性率為界值點，將QKI表達分為低表達（≤25%）和高表達（>25%）。通過統(tǒng)計學(xué)分析，QKI高

9、表達與腫瘤分級呈負相關(guān)，而與分期無明顯相關(guān)性，QKI高表達的患者生存率明顯高于QKI低表達患者。
　　結(jié)論：
　　通過實驗研究，我們首次發(fā)現(xiàn)了RNA結(jié)合蛋白QKI在腎透明細胞癌中發(fā)揮著抑癌的作用。我們發(fā)現(xiàn)QKI在臨床腎癌腫瘤組織中表達下調(diào)，并且QKI的表達水平與腫瘤的分級呈負相關(guān)，與患者的生存期呈正相關(guān)；細胞實驗表明，過表達QKI能夠抑制腎癌細胞的增殖，促進腫瘤細胞的凋亡以及抑制腫瘤細胞周期；同時，過表達QKI能夠抑制低氧誘