龍芩草、通絡救腦組方成分的藥學、藥效學及作用機制.pdf

1、1目的現代中藥制劑應具有“三效(高效、速效、長效)”、“三小(劑量小、毒性小、副作用小)”、“五方便(儲存、運輸、服用、攜帶和生產方便)”的優(yōu)點，并且安全、有效、可控、穩(wěn)定。本研究在中醫(yī)藥理論指導下，將中藥地龍、黃芩、甘草；梔子、三七進行有效部位提取，分別精制而成龍芩草噴霧劑、龍芩草口含片和通絡救腦注射液、通絡救腦口服微乳等現代劑型。通過藥學、藥效學及其相關作用機制的研究，成分基本明確、藥效可以肯定、質量能夠控制，進而確定合理的制劑工藝

2、，建立科學的質量控制標準。并通過口、鼻腔粘膜給藥(龍芩草噴霧劑、口含片)和運用納米級微乳載藥體系口服給藥(通絡救腦口服微乳)，提高生物利用度，增進療效。 2方法 研究內容主要包括龍芩草噴霧劑、口含片的制備工藝、質量標準、穩(wěn)定性、主要藥效學、家兔體內藥代動力學、毒理學等：通絡救腦口服微乳制備工藝、質量標準、穩(wěn)定性、家兔體內血藥濃度的測定。 龍芩草組方部分：龍芩草組方由地龍、黃芩、甘草組成，結合病毒感染所致的流感，上

3、呼吸道感染等癥特點，遵循中醫(yī)藥理論配伍規(guī)律，經藥理學篩選得到最佳處方，運用現代制藥新技術，經高效提取分離有效部位制成經口、鼻腔粘膜給藥制劑，具有清肺利咽，解毒瀉熱之功效。 (1)龍芩草噴霧劑、口含片制備工藝：地龍采用生物化學方法提取有效成分；黃芩依《中國藥典》2005年版一部黃芩提取物項下要求、甘草依國家藥品標準WS-10001(HD1269)-2002項下甘草酸單銨鹽有關規(guī)定，用HPLC方法控制黃芩苷和甘草酸單銨鹽含量；依照噴

4、霧劑、口含片的制劑要求確定各步參數，從而確定制備工藝。(2)龍芩草噴霧劑、口含片質量標準：采用薄層色譜法對方中黃芩、甘草、地龍進行定性鑒別，用HPLC方法對方中黃芩苷進行含量測定，確定制劑黃芩苷含量限度；并按《中國藥典》附錄制劑通則口服液、口含片項下規(guī)定制定檢查項目。 (3)龍芩草制劑穩(wěn)定性實驗：用留樣觀察方法、按擬定質量標準項目，檢查各項。 (4)龍芩草噴霧劑、口含片藥效學實驗：采用大腸桿菌內毒素致日本大耳白家兔發(fā)熱模

5、型，觀察龍芩草制劑的解熱作用及其對TNF-α的影響；用小鼠氨水引咳法，觀察龍芩草制劑對模型小鼠的鎮(zhèn)咳功效；采用油酸致大鼠急性肺損傷模型，運用免疫組織化學方法，觀察龍芩草噴霧劑對大鼠肺組織內TNF、IL-6、IL-2等炎性因子的表達的影響；采用流感病毒A1型(H1N1)鼠肺適應株FM-1致小鼠感染，測得LD50;測得龍芩草小鼠的最大耐受量；以小鼠死亡率、保護率、平均生活日及延長生命率為指標，測得龍芩草噴霧劑對流感病毒致小鼠死亡的保護作用。

6、 (5)龍芩草噴霧劑家兔體內藥代動力學實驗：實驗采用家兔經口、鼻腔粘膜給藥與口服給藥，分別在不同時間取血，測得相應時間點的血藥濃度，比較二給藥途徑的血藥濃度，計算相對生物利用度；經霧化給藥，剝離家兔口、鼻腔粘膜，測定粘膜內含藥。 (6)龍芩草噴霧劑、口含片毒理學實驗：按《藥理實驗方法學》方法，對龍芩草制劑粘膜毒性、急性毒性、長期毒性進行實驗，觀察各項指標及制作病理切片。 通絡救腦組方部分：通絡救腦處方由梔子、三七

7、兩味中藥組成，結合近年來有關腦缺血病理過程及相關藥物的研究結果，遵循中醫(yī)藥理論配伍規(guī)律，經藥理學篩選得到最佳處方，運用現代制藥新技術，經高效提取分離有效部位制成注射劑、口服微乳，具有涼血解毒、化瘀通絡之功效。通絡救腦注射劑我們在2003年臨床前工作已完成，正在臨床試驗后期，已經形成碩士論文，本論文不再重述實驗過程。 (7)通絡腦口服微乳制備工藝實驗：方中梔子運用正交實驗設計優(yōu)化最佳提取工藝，用活性炭分離精制，得到梔子提取物；用H

8、PLC儀梯度洗脫，測得三七總皂苷主要有效成分；采用三點相圖法，優(yōu)化空微乳液的最佳比例。 (8)通絡救腦口服微乳質量標準實驗：采用薄層色譜鑒別梔子、三七；運用HPLC方法測定梔子苷含量；按中國藥典2005年版附錄口服液要求，確定各參數。 (9)絡救腦穩(wěn)口服微乳定性實驗：用留樣觀察法，按擬定質量標準項目考核。 (10)通絡救腦口服微乳家兔體內血藥濃度的測定：以人參皂苷Rg1為指標，家兔口服人參皂苷Rg1微乳液、水溶液

9、，與耳緣靜脈注射血栓通注射液相比較，測得口服微乳的生物利用度。 3結果 龍芩草部分： (1)龍芩草噴霧劑、口含片制備工藝：用生物化學方法提取地龍有效成分，保證地龍中各種酶的活性；檢測得到黃芩提取物中黃芩苷含量85.5％、甘草提取物中甘草酸單銨鹽含量75％，均符合規(guī)定。根據各藥性質確定制備工藝，并經中試規(guī)模樣品生產，結果工藝參數穩(wěn)定，制備的噴霧劑、口含片符合規(guī)定。 (2)龍芩草噴霧劑、口含片質量標準：確定了

10、薄層色譜方法；規(guī)定了檢查項目；制定了制劑黃芩苷含量限度，每25ml樣品黃芩苷含量不低于100mg，實驗方法學考察均符合要求。 (3)龍芩草噴霧劑、口含片初步穩(wěn)定性實驗：實驗室留樣觀察三月，按質量標準項目檢查，包括外觀、鑒別、檢查、含量測定、衛(wèi)生學，均符合規(guī)定。 (4)龍芩草噴霧劑、口含片藥效學實驗：對于脂多糖致家兔發(fā)熱模型有顯著的解熱作用(P＜0.01)，且劑量增大時作用增強，實驗顯示脂多糖可刺激ATⅡ細胞分泌TNF-α

11、，而龍芩草噴霧劑能夠抑制TNF-α的異常增加；龍芩草噴霧劑中劑量組對氨水引咳的小鼠的咳嗽次數明顯減少，并與空白組相比較，具有極顯著差異(p＜0.01)，其他各組無明顯改變(P＞0.05)；正常對照組大鼠肺組織內TNF-α、IL-6、IL-2的表達較低，肺組織內可見散在的TNF-α、IL-6、IL-2陽性細胞，油酸所致急性肺損傷模型大鼠肺組織內TNF-α、IL-6、IL-2的表達明顯增高，肺組織內TNF-α、IL-6、IL-2陽性細胞較多

12、，呈強表達，陽性藥組、龍芩草噴霧劑大、中劑量組能明顯降低油酸所致急性肺損傷模型大鼠肺組織內TNF-α、IL-6、IL-2的表達，肺組織內TNF-α、IL-6、IL-2陽性細胞較模型組明顯減少，表達減弱，與模型組比較具有統計學意義(p＜0.05或0.01)，小劑量組降低不明顯；甲(A1)型流感病毒鼠肺適應株FM-1經小鼠噴霧感染測定其半數致死量(LD50)為10-3.68，小鼠對龍芩草噴霧劑最大耐受量為臨床用量的100倍，對于小鼠死亡的保

13、護作用，除給藥組的0.825g/kg劑量組(P＞0.05)外，其它劑量組(1.65g/kg、3.3g/kg、6.6g/kg)均有顯著性差異(P＜0.01)。 (5)龍芩草噴霧劑家兔體內藥代動力學實驗：二種給藥途徑都大約在70min時血藥濃度達峰值，且經口、鼻腔給藥的峰值時的血藥濃度是灌胃給藥的1.6倍，口、鼻腔給藥相對于灌胃給藥的相對生物利用度為166.5％，霧化給藥后，口、鼻腔粘膜中測到含有黃芩苷成分。 (6)毒理學試

14、驗顯示，龍芩草噴霧劑、口含片高、中、低劑量組合組織臟器均無明顯病理變化，可以認為無毒。 (7)通絡救腦口服微乳制備工藝：確定梔子提取工藝的各種參數，得到空微乳三相最佳比例為吐溫-丙二醇-肉豆蔻酸異丙酯-水(9：3：1：30)，得到口服微乳的制劑成型工藝。 (8)通絡救腦口服微乳質量標準：確定了薄層色譜方法；規(guī)定了檢查項目；制定了制劑梔子苷含量限度，每5ml樣品梔子苷含量不低于45mg，實驗方法學考察均符合要求。

15、(9)通絡救腦口服微乳穩(wěn)定性試驗：實驗室留樣觀察三月，按質量標準項目檢查，包括外觀、鑒別、檢查、含量測定、衛(wèi)生學，均符合規(guī)定。 (10)通絡救腦口服微乳生物利用度的測定：以人參皂苷Rg1為指標，家兔口服三七總皂苷微乳液、水溶液，與耳緣靜脈注射血栓通注射液相比較，結果為注射液血藥濃度峰值出現在給藥后5min，然后逐漸衰減，速率較快；微乳灌胃給藥后10min，血藥濃度達峰值，然后逐漸衰減，速率較注射液慢；水溶液只在10、15min時

16、間點測得，且濃度不高。測得口服微乳的生物利用度為62.17％。 4結論 綜上兩部分實驗結果，經提取地龍、黃芩、甘草；梔子、三七有效部位，制成龍芩草噴霧劑、龍芩草口含片；通絡救腦口服微乳，基本達到中藥現代制劑的“三小”、“三效”、“五方便”要求。龍芩草噴霧劑、口含片具有清肺利咽，解毒瀉熱功效，用于病毒感染所致的流感，上呼吸道感染作用顯著，經口、鼻腔粘膜給藥，避免肝臟首過效應的影響，顯著提高生物利用度；通絡救腦口服微乳具有涼