武漢漢族人群TLR4、RAGE基因多態(tài)性與糖尿病相關性研究及人體白色脂肪組織TLR4表達與肥胖相關性研究.pdf

1、第一部分、武漢漢族人群TLR4、RAGE基因多態(tài)性與糖尿病相關性研究。 目的: 研究武漢漢族人群TLR4基因Asp299Gly、RAGE基因1704G/T，G82S單核苷酸多態(tài)性與2型糖尿?。╰ype 2 diabetes mellitus，T2DM）及其慢性并發(fā)癥的關系。 方法：對506名T2DM病人，182名糖耐量正常（normal glucose tolerance，NGT）的個體，運用連接酶檢測反應(ligase

2、 detection reaction，LDR)聯(lián)合多聚酶鏈反應技術（polymerase chain reaction，PCR）檢測TLR4基因Asp299Gly、RAGE基因1704G/T，G82S單核苷酸多態(tài)性，并分析它們與T2DM及其慢性并發(fā)癥的關系。 結果：所有樣本未發(fā)現(xiàn)TLR4基因Asp299Gly位點變異，均為AA野生基因型；在T2DM和NGT個體中，1704G/T、G82S基因型和等位基因型頻率在T2DM和NGT

3、個體中的分布無明顯差異。在T2DM中，1704T等位基因者HOMA-β顯著低于704G等位基因者（1.68±0.43 VS 1.80±0.37，P=0.03），而且，1704T等位基因者高血壓的伴發(fā)率低于其他基因型(P=0.001)；82S等位基因者HOMA-β略低于G82等位基因者（1.70±0.4 VS 1.81±0.38，P=0.05），在正常對照組中未發(fā)現(xiàn)這種差異。進一步研究發(fā)現(xiàn)82S等位基因者視網(wǎng)膜病變的發(fā)生率高于G82等位基

4、因者（43.3％VS 23.8％，P<0.001），同時未見這兩種基因多態(tài)性與其他慢性并發(fā)癥相關。在T2DM中，糖尿病伴視網(wǎng)膜病變組G82S表現(xiàn)為G/A+AA基因型頻率(60.6％)和A等位基因型頻率(36.4％)顯著高于T2DM不伴糖尿病視網(wǎng)膜病變組(38.8％；20.9％. P<0.05)。由1704G/T和G82S構建的單倍體型分析發(fā)現(xiàn)G-A單倍體型發(fā)生視網(wǎng)膜病變的危險顯著增加[odds ratio(OR) for 2.120，9

5、5％confidence interval(CI):1.185-3.792]。多因素logistic 回歸分析發(fā)現(xiàn)82S等位基因變異和糖尿病病程是T2DM視網(wǎng)膜病變的獨立危險因素(OR=2.964，95％CI:1.013-5.46，P=0.029；OR=1.013，95％CI：1.007-1.02，P<0.001)。 結論：在武漢漢族人群中，RAGE基因82S等位基因變異預示胰島B細胞功能降低，視網(wǎng)膜病變的危險性增加；1704T

6、等位基因變異則預示胰島B細胞功能降低，但伴高血壓比例降低；由1704G/T和G82S構建的單倍體型中，G-A單倍體型是發(fā)生糖尿病視網(wǎng)膜病變的基因標記。 第二部分、人體白色脂肪組織TLR4表達與肥胖相關性研究。 目的：最新研究顯示脂肪組織在先天免疫反應中起著一定的作用。而且，肥胖者的白色脂肪組織（white adipose tissue，WAT）具有巨噬細胞浸潤和脂肪細胞肥大的特征性變化。研究目的是確定人類WAT中TLR4

7、蛋白質表達，并闡明其與肥胖的代謝表型、炎癥標志物及白色脂肪組織形態(tài)學的關系。 方法：成對摘取30位擇期膽結石摘除術的男性患者[年齡，34-60歲；體重指數(shù)（body mass index，BMI）：23.8±3.5 kg/m2]的腹部網(wǎng)膜脂肪和皮下脂肪。按標本來源者的體重指數(shù)和空腹血糖將標本分為正常體重組、超重非糖尿病亞組和超重糖尿病亞組。Western blot 測定WAT中TLR4的蛋白質表達。免疫組化CD68抗體染色顯示活

8、性巨噬細胞。免疫比濁法測定血清高敏C反應蛋白（high-sensitive C-reactive protein，hs-CRP）。顯微鏡定量分析巨噬細胞浸潤程度和脂肪細胞大小。多元線性回歸分析WAT中TLR4蛋白質表達水平與肥胖的表型、hs-CRP及WAT形態(tài)學關系。 結果：Western blot明確人類皮下和網(wǎng)膜WAT(omental WAT，oWAT)中有TLR4的蛋白質表達。同一個體皮下WAT(subcutaneous

9、WAT，scWAT)中TLR4的蛋白質表達水平顯著低于oWAT(0.20±0.03 VS 0.59±0.19，P<0.001)。超重非糖尿病亞組TLR4的蛋白質表達水平無論oWAT和scWAT均高于正常體重組和超重糖尿病亞組(P<0.01)。超重糖尿病亞組oWAT中TLR4的表達水平亦高于正常體重組(P<0.01)。oWAT中CD68+數(shù)是scWAT的4倍(24.4±3.2 VS 6.1±2.9，P<0.001)。超重非糖尿病亞組和超重

10、糖尿病亞組oWAT和scWAT中CD68+數(shù)均高于正常體重組(P<0.01)，但超重的兩亞組間無明顯差異。超重非糖尿病亞組oWAT中平均脂肪細胞直徑及橫截面積顯著大于正常體重組(69.2±19.37μm VS 44.2±10.4μm，P=0.003；4014.1±2443.1μm2 VS 1613.4±755.6μm2，P=0.04)。多元線性回歸分析提示：oWAT中蛋白質表達水平與oWAT中巨噬細胞浸潤程度(b’=0.635，P<0.