尾加壓素Ⅱ激活大鼠主動(dòng)脈外膜成纖維細(xì)胞Smad2-3促進(jìn)結(jié)締組織生長(zhǎng)因子表達(dá).pdf

1、背景和目的：
　　血管纖維化表現(xiàn)為血管壁細(xì)胞外基質(zhì)(Extracellular matrix,ECM)異常增多,過度沉積和基質(zhì)重塑,導(dǎo)致血管管徑縮小和/或管壁增厚,其發(fā)生機(jī)制是心血管領(lǐng)域面臨的重要課題之一,目前尚未完全闡明。人類尾加壓素II(Urotensin II,UII)是由11個(gè)氨基酸殘基組成的縮血管活性肽,具有廣泛的生物學(xué)效應(yīng),現(xiàn)已證明UII能夠強(qiáng)烈收縮動(dòng)脈血管,促進(jìn)血管平滑肌細(xì)胞和成纖維細(xì)胞增殖,促進(jìn)細(xì)胞遷移,促進(jìn)泡沫細(xì)

2、胞形成等等,我們課題組前期研究發(fā)現(xiàn),UII能夠促進(jìn)血管外膜成纖維細(xì)胞表型轉(zhuǎn)化,并能夠激活Smad信號(hào)途徑,提示它是一種新的促進(jìn)血管纖維化的縮血管活性肽,在血管纖維化中的作用和機(jī)制值得深入研究。另有報(bào)道,結(jié)締組織生長(zhǎng)因子(Connective tissue growth factor,CTGF)是一種新發(fā)現(xiàn)的可刺激成纖維細(xì)胞增殖和膠原沉積的生長(zhǎng)因子,能夠促進(jìn)成纖維細(xì)胞細(xì)胞表型轉(zhuǎn)化、細(xì)胞增殖、遷移和細(xì)胞外基質(zhì)沉積等。然而,UII和CTGF在

3、血管纖維化中的關(guān)系尚未闡明。為此,本工作采用體外培養(yǎng)的大鼠胸主動(dòng)脈外膜成纖維細(xì)胞,以論證UII可否通過激活Smad信號(hào)促進(jìn)血管外膜成纖維細(xì)胞表達(dá)CTGF的假設(shè),從而探討血管纖維化和UII作用的新機(jī)制,為防治血管纖維化進(jìn)展提供新的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：
　　1.原代培養(yǎng)雄性SD大鼠主動(dòng)脈血管外膜成纖維細(xì)胞,實(shí)驗(yàn)采用第3-5代細(xì)胞。待細(xì)胞乏血清同步化24小時(shí)后,分別用不同濃度的UII(10-10-10-7mol/l)刺激不同時(shí)間

4、,采用蛋白免疫印跡試驗(yàn)(Western blot)測(cè)定細(xì)胞中CTGF的表達(dá)變化;明確UII刺激大鼠血管外膜成纖維細(xì)胞表達(dá)CTGF的濃度及時(shí)間曲線。
　　2.采用RNA干擾技術(shù),分別使Smad2和Smad3基因沉默,再以10-9mol/lUII刺激血管外膜成纖維細(xì)胞24小時(shí),采用Western blot來檢測(cè)血管外膜成纖維細(xì)胞中CTGF的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：
　　1.UII以濃度依賴性方式刺激大鼠血管外膜成纖維細(xì)胞合成

5、CTGF。分別采用10-10-10-7mol/l的UII刺激大鼠血管外膜成纖維細(xì)胞24小時(shí),結(jié)果發(fā)現(xiàn)CTGF表達(dá)呈濃度依賴性,其中10-9mol/l組表達(dá)量最高(P<0.01)。
　　2.UII以時(shí)間依賴的方式刺激血管外膜成纖維細(xì)胞合成CTGF。采用10-9mol/lUII分別刺激大鼠血管外膜成纖維細(xì)胞0、3、6、12和24小時(shí)后,細(xì)胞中CTGF表達(dá)隨刺激時(shí)間延長(zhǎng)而逐漸增加,至12小時(shí)表達(dá)量明顯增高,24小時(shí)進(jìn)一步增加(P<0.0

6、5),表明UII能夠以時(shí)間依賴方式刺激外膜成纖維細(xì)胞表達(dá)CTGF。
　　3.通過RNA干擾使Smad2和Smad3基因分別沉默,可以減弱UII誘導(dǎo)的大鼠血管外膜成纖維細(xì)胞表達(dá)CTGF,siRNA處理組均較UII組降低(P<0.01)。
　　結(jié)論：
　　本研究發(fā)現(xiàn)UII能夠以濃度和時(shí)間依賴的方式促進(jìn)大鼠血管外膜成纖維細(xì)胞表達(dá)CTGF;Smad2和Smad3在介導(dǎo)UII促進(jìn)大鼠血管外膜成纖維細(xì)胞表達(dá)CTGF中發(fā)揮了重要作用