TGF-β1-H2O2增強(qiáng)LuminalA型乳腺癌細(xì)胞T-47D抗失巢凋亡潛能.pdf

1、目的：初步探討TGF-β1/H2O2增強(qiáng)Luminal-A型乳腺癌細(xì)胞T-47D的抗失巢凋亡潛能。
　　方法：（1）細(xì)胞培養(yǎng)：按照實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)分組并在相應(yīng)時(shí)間加入誘導(dǎo)因子或者信號(hào)通路抑制劑，收集細(xì)胞用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)研究；（2）空白對(duì)照組與各實(shí)驗(yàn)組使用軟瓊脂集落形成實(shí)驗(yàn)和流式細(xì)胞儀檢測(cè)Luminal-A型乳腺癌細(xì)胞T-47D的抗失巢凋亡能力；（3）Real-time PCR和Western blot用于檢測(cè)抗失巢凋亡相關(guān)基因mRNA和蛋白質(zhì)

2、的表達(dá)水平；（4）Western blot檢測(cè)與抗失巢凋亡相關(guān)的信號(hào)途徑；（5）使用SNAI2 shRNA慢病毒載體轉(zhuǎn)染T-47D細(xì)胞，沉默SNAI2的表達(dá)；（6）裸鼠尾靜脈注射CFSE標(biāo)記的腫瘤細(xì)胞T-47D，冰凍切片后，觀察肺內(nèi)轉(zhuǎn)移的乳腺癌細(xì)胞滯留情況。
　　結(jié)果：（1）經(jīng)過(guò)TGF-β1/H2O2誘導(dǎo)，流式細(xì)胞儀和軟瓊脂集落形成實(shí)驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，TGF-β1/H2O2組相對(duì)于control組、H2O2組、TGF-β1組發(fā)生凋

3、亡的細(xì)胞百分?jǐn)?shù)顯著減少，同時(shí)計(jì)數(shù)多個(gè)視野取平均值后所得的細(xì)胞克隆數(shù)增多具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；（2）經(jīng)過(guò)H2O2、TGF-β1、TGF-β1/H2O2誘導(dǎo)后，TGF-β1/H2O2組相對(duì)于control組、TGF-β1組、H2O2組的TGF-βRⅡ、SNAI2和Bcl-2的表達(dá)上調(diào)具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；（3）TGF-β1/H2O2通過(guò)ERK1/2的激活調(diào)節(jié)TGF-βRⅡ和SNAI2的表達(dá)；（4）在SNAI2 shRNA慢病毒載體沉默SNAI2表達(dá)

4、后，Western blot檢測(cè)發(fā)現(xiàn)TGF-β1/H2O2誘導(dǎo)后，Bcl-2和TGF-βRⅡ的表達(dá)上調(diào)被阻斷；（5）與體外實(shí)驗(yàn)一致，裸鼠尾靜脈注射CFSE標(biāo)記的T-47D細(xì)胞后，TGF-β1/H2O2誘導(dǎo)可以顯著增加獲得抗失巢凋亡能力的T-47D腫瘤細(xì)胞外滲進(jìn)入肺組織；（6）使用SNAI2 shRNA慢病毒載體沉默SNAI2的表達(dá)后，經(jīng)過(guò)TGF-β1/H2O2誘導(dǎo)，TGF-β1/H2O2 SNAI2 shRNA組相對(duì)于control S