癲癇突觸機制中發(fā)動蛋白、突觸融合蛋白、突觸囊泡膜蛋白及相關蛋白研究.pdf

1、第一部分、耐藥性癲癇患者突觸囊泡相關蛋白研究
　　 目的：在本課題組既往耐藥性癲癇患者和癲癇模型腦組織基因芯片研究基礎上，檢測耐藥性癲癇患者腦組織中突觸囊泡功能相關蛋白的差異表達，探索突觸囊泡功能相關蛋白在耐藥性癲癇突觸機制中的作用。
　　 方法：收集耐藥性癲癇患者手術后的腦組織，按病程不同分為短病程和長病程兩組，采用RT-PCR、免疫組化、免疫熒光、western blot分別對突觸囊泡相關蛋白Dnm1，Stx1和Sy

2、t1的表達部位和表達量進行測定，通過與對照組的比較，探討其在耐藥性癲癇發(fā)病機制中的作用。
　　 結果：我們的結果發(fā)現(xiàn)Dnm1，Stx1和Syt1主要在神經(jīng)元胞膜和胞漿中表達。其中，Dnm1在長病程和短病程的耐藥性癲癇患者中表達較對照組顯著增強（P<0.05），而在長短病程組間無顯著差異（P>0.05）；Stx1和Syt1在長病程的耐藥性癲癇患者中表達較短病程組和對照組顯著增強（P<0.05），Stx1和Syt1的表達在短病程和對

3、照組間無顯著差異（P>0.05）。
　　 結論：研究提示耐藥性癲癇患者腦組織中存在突觸囊泡相關蛋白的差異表達，這些改變在耐藥性癲癇的發(fā)病及維持中可能起一定作用。其中，Dnm1主要參與網(wǎng)格蛋白介導的突觸囊泡的內(nèi)吞過程，其高表達提示在癲癇患者病程早期就存在囊泡內(nèi)吞功能的加強；Stx1主要與胞吐過程中囊泡與胞膜的融合有關，Syt1作為鈣感受器調(diào)節(jié)囊泡的胞吐過程，同時也與其他蛋白協(xié)同，促進網(wǎng)格蛋白包被的形成，調(diào)節(jié)囊泡的內(nèi)吞，所以在耐藥性

4、癲癇的后期，突觸囊泡的內(nèi)吞和胞吐功能均增強，提示囊泡循環(huán)的增強在耐藥性癲癇的發(fā)生及發(fā)展中有重要作用。
　　 第二部分、耐藥性癲癇患者血液、腦脊液中Dnm1、talin2及κ-IgLC，λ-IgLC蛋白的檢測
　　 目的：本課題組在前期耐藥性癲癇患者腦脊液蛋白質(zhì)組學研究中發(fā)現(xiàn)，talin2蛋白出現(xiàn)在癲癇患者腦脊液中，在對照組沒有表達。talin2是一種細胞粘附因子，存在于突觸部位，可能與突觸功能相關?；诖耍覀冊O計了本研

5、究，以進一步了解血液、腦脊液中突觸相關蛋白Dnm1和talin2的差異表達和κ-IgLC，λ-IgLC的變化，為臨床尋找新的藥物治療靶點和生物標記物提供實驗依據(jù)。
　　 方法：將患者分為四組：病毒性腦炎組（AE），病毒性腦炎合并癲癇發(fā)作組（AESS），治療有效腦炎后癲癇（EPEE）及難治性腦炎后癲癇組（RPEE），分別采集血清、腦脊液。運用酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）定量測定血清、腦脊液中的talin2，Dnm1、κ-IgLC

6、，λ-IgLC的濃度，并與對照組進行比較。
　　 結果：共62例患者納入AE組（n=16），AESS（n=16），EPEE（n=15）及RPEE（n=15）。結果發(fā)現(xiàn)在AE、AESS、PEE及RPEE組腦脊液中的Dnm1濃度與血清中沒有顯著差異；RPEE組腦脊液中talin2的表達顯著高于其他組，而血清中talin2低于其他組；腦脊液中κ-IgLC，λ-IgLC和相應IgLCκ/λ比值的變化在各組中無顯著差異，而血清中κ-IgL

7、C，λ-IgLC和IgLCκ/λ比值在各組間有顯著差異：在RPEE中，血清κ-IgLC濃度較其他三組顯著增高；在RPEE中，血清λ-IgLC濃度較其他三組顯著降低，而EPEE和AESS的血清λ-IgLC濃度較AE患者顯著降低；血清IgICκ/λ比值在RPEE中顯著高于其他三組，而EPEE和AESS的血清IgLCκ/λ比值較AE患者顯著增高。
　　 結論：talin2在RPEE患者腦脊液、血清中的表達顯著增高，提示耐藥性癲癇的形成