CCR8在結(jié)腸癌中的表達(dá)及其對結(jié)腸癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響.pdf

1、本文分三個部分進(jìn)行探討：
　　第一部分：結(jié)腸癌中CCR8的表達(dá)及臨床意義
　　目的：檢測結(jié)腸癌組織及結(jié)腸癌細(xì)胞株中趨化因子受體CCR8的表達(dá)，并探討其臨床意義。
　　方法：采用免疫組織化學(xué)方法檢測70例結(jié)腸癌以及癌旁正常組織中CCR8的表達(dá)，采用免疫印跡和流式細(xì)胞術(shù)檢測6株結(jié)腸癌細(xì)胞株中CCR8的表達(dá)。分析結(jié)腸癌中CCR8的表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系。
　　結(jié)果：免疫組織化學(xué)顯示在70例結(jié)腸癌組織中，CCR8陽性表

2、達(dá)率為47.1％（33/70），癌旁正常組織基本不表達(dá)CCR8，腸系膜淋巴結(jié)中可見趨化因子CCL1表達(dá)。結(jié)腸癌中CCR8的表達(dá)與腫瘤的局部侵犯深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和臨床分期相關(guān)（p＜0.01），而與患者年齡、性別、腫瘤體積和分化程度不相關(guān)（p＞0.05）。CCR8在6株結(jié)腸癌細(xì)胞株中均有表達(dá)，其中SW480細(xì)胞株表達(dá)相對較高。
　　結(jié)論：CCR8在部分結(jié)腸癌組織中表達(dá)，并與結(jié)腸癌的局部侵犯、淋巴轉(zhuǎn)移和臨床分期相關(guān)，提示其可能參與了結(jié)腸

3、癌侵襲和轉(zhuǎn)移的過程。結(jié)腸癌細(xì)胞株 SW480可用于進(jìn)一步研究。
　　第二部分：CCL1/CCR8對結(jié)腸癌SW480細(xì)胞胞內(nèi)鈣動員、增殖、凋亡和遷移的影響
　　目的：研究趨化因子CCL1及其受體CCR8對結(jié)腸癌細(xì)胞株SW480胞內(nèi)鈣動員、體外增殖、凋亡和遷移能力的影響。
　　方法：采用鈣離子探針Fluo-3結(jié)合流式細(xì)胞術(shù)，檢測CCL1作用于SW480細(xì)胞表面的CCR8所引起的胞內(nèi)鈣離子濃度變化。MTT增殖實(shí)驗(yàn)、Annex

4、in V/PI檢測細(xì)胞凋亡和Transwell腫瘤細(xì)胞遷移試驗(yàn)檢測CCL1對SW480細(xì)胞增殖、凋亡和遷移能力的影響。
　　結(jié)果：CCL1能夠引起SW480細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度的升高，且這一效應(yīng)能夠被CCR8拮抗劑MC148所阻斷。不同濃度的CCL1作用于SW480細(xì)胞24h、48h或72h后并不影響其增殖能力。100ng/ml CCL1或100ng/ml MC148不會促進(jìn)或抑制5-FU對SW480細(xì)胞的凋亡作用。10ng/ml-1

5、00ng/ml CCL1能夠增強(qiáng)SW480細(xì)胞的遷移能力，并呈現(xiàn)濃度依賴性，其作用依賴于CCL1的濃度梯度，并能被MC148所阻斷。
　　結(jié)論：SW480細(xì)胞表面表達(dá)的CCR8具有生物學(xué)活性。CCL1作用于CCR8能夠明顯增強(qiáng)SW480細(xì)胞的體外遷移能力，但不影響SW480細(xì)胞的增殖和抗凋亡能力。
　　第三部分：CCL1/CCR8對結(jié)腸癌SW480細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移相關(guān)因子表達(dá)的影響
　　目的：研究趨化因子CCL1及其受體

6、CCR8對結(jié)腸癌細(xì)胞株SW480侵襲能力和基質(zhì)金屬蛋白酶2（MMP2）、基質(zhì)金屬蛋白酶9（MMP9）、E-鈣粘蛋白（E-cadherin）和血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）表達(dá)的影響。
　　方法：采用人工基質(zhì)膠Matrigel結(jié)合Transwell小室構(gòu)建體外侵襲模型，研究CCL1對SW480細(xì)胞侵襲能力的影響。用實(shí)時熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（Real-Time PCR）和免疫印跡檢測CCL1對SW480細(xì)胞表達(dá)MMP2、MMP9、E-

7、cadherin和VEGF的影響。
　　結(jié)果：CCL1能夠明顯增強(qiáng)SW480細(xì)胞的體外侵襲能力，且這一效應(yīng)能夠被CCR8拮抗劑MC148所阻斷。100ng/ml CCL1作用于SW480細(xì)胞12h后能夠顯著上調(diào)MMP2 mRNA和蛋白的表達(dá)，并顯著下調(diào) E-cadherin mRNA和蛋白的表達(dá)，且其效應(yīng)能被MC148所阻斷。100ng/ml CCL1或MC148作用12h后，SW480細(xì)胞中MMP9和VEGF的mRNA和蛋白表達(dá)