乙型肝炎病毒基因型對(duì)肝細(xì)胞癌生物學(xué)性狀及行為影響研究.pdf

1、研究背景:
　　 原發(fā)性肝細(xì)胞癌(HCC)是我國(guó)常見惡性腫瘤之一；乙型肝炎病毒(HBV)感染也是亞洲地區(qū)肝癌患者最常見的致病因素。已有研究證明乙型肝炎病毒與肝癌的發(fā)生密切相關(guān)。近年來，乙型肝炎病毒基因及其亞型的研究進(jìn)展逐漸被人們所重視，有學(xué)者試圖從此方面入手，研究肝癌的發(fā)生發(fā)展及預(yù)后。肝癌細(xì)胞的生物學(xué)行為(包括侵襲性在內(nèi))決定其惡性程度，很大程度上影響著手術(shù)效果和預(yù)后。在臨床病理方面，如癌組織分化程度低、子灶形成、多發(fā)癌灶、包膜

2、不完整或無包膜形成、血管癌栓等均提示預(yù)后不良。國(guó)外已有關(guān)于乙型肝炎病毒基因型對(duì)肝病嚴(yán)重程度影響的研究，但是對(duì)乙型肝炎病毒基因型與肝細(xì)胞癌之間的臨床病理聯(lián)系，國(guó)內(nèi)外研究的尚少。
　　 研究目的:
　　 了解感染不同基因型HBV的HCC患者臨床特征和腫瘤組織病理學(xué)的差異，初步探討HBV基因型與HCC生物學(xué)性狀及行為的相關(guān)性。
　　 材料和方法:
　　 1.病例選擇：本實(shí)驗(yàn)選擇本院99例伴HBV感染的HCC患者

3、為研究對(duì)象。入院時(shí)常規(guī)進(jìn)行肝功能、病毒血清標(biāo)志物、HBV-DNA定量、腫瘤標(biāo)志物、B超、CT/MR等檢查，根據(jù)檢查結(jié)果及術(shù)后病理結(jié)果，排除其他肝炎病毒感染及其他肝臟疾病。
　　 2.標(biāo)本收集和制作：所有病例術(shù)前抽取5～6ml患者靜脈血，離心，取上層血清，于-80℃冰箱凍存；相應(yīng)患者腫瘤組織標(biāo)本收集并行HE染色、網(wǎng)織纖維染色。
　　 3.乙型肝炎病毒基因型檢測(cè)：采用巢式PCR方法擴(kuò)增HBV基因的S區(qū)，而后對(duì)特異性產(chǎn)物進(jìn)行基

4、因測(cè)序，測(cè)序結(jié)果輸入MEGA基因分析軟件進(jìn)行進(jìn)化樹分析。
　　 4.病理學(xué)檢查：包括大體標(biāo)本檢查和HE染色、網(wǎng)織纖維染色玻片鏡檢，由兩位病理醫(yī)生獨(dú)立觀察，內(nèi)容包括腫瘤最大徑、腫瘤數(shù)目(單發(fā)還是多發(fā)、衛(wèi)星子灶形成)、血管侵犯和癌栓、包膜形成、腫瘤組織分化、周圍肝組織纖維化分期。
　　 5.術(shù)后隨訪：所有入選病例根治性手術(shù)后，每2～3周復(fù)查一次，常規(guī)檢測(cè)AFP和腹部B超，懷疑復(fù)發(fā)者行B超造影、CT/MR檢查。統(tǒng)計(jì)患者的疾病進(jìn)

5、展時(shí)間和無病生存時(shí)間。
　　 6.使用SPSS11.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行醫(yī)學(xué)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。正態(tài)計(jì)量資料采用F檢驗(yàn)、t檢驗(yàn)或單因素方差分析法分析；偏態(tài)分布資料采用Wilcoxon或Kwallis秩和檢驗(yàn)分析；定性資料采用卡方檢驗(yàn)或Fisher精確概率法分析；疾病進(jìn)展時(shí)間和無病生存時(shí)間用Log-Rank生存分析。以上檢驗(yàn)均以p＜0.05認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果:
　　 99例患者中，共檢測(cè)出陽性結(jié)果87例，其中B

6、2型組37例(42.5％)，C型組50例(57.5％)。男性77例(88.5％)，女性10例(11.5％)，平均年齡為51.19±11.39歲。兩組性別、年齡均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，B2型組患者在40歲以下年齡段及50歲以下年齡段所占比例相對(duì)較大。
　　 B2型組AST水平高于C型組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p=0.015＜0.05)，其他肝功能指標(biāo)無明顯差異。B2、C型兩組血清HBV-DNA含量、HBeAg陽性、HBeAb陽性比率和HBeA

7、g、HBeAb陰性比率差異均未達(dá)到統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。B2型組患者術(shù)前AFP水平較C型組者高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p=0.035＜0.05)。
　　 兩組在腫瘤大小、數(shù)目及分化程度無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。B2型組周圍脈管癌栓形成、包膜不完整或無包膜形成者較C型組多，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p=0.014＜0.05，p=.008＜0.05)；C型組肝纖維化較B2型組明顯(p=0.020＜0.05)。
　　 排除隨訪丟失和不符合隨訪標(biāo)準(zhǔn)病例后，術(shù)后

8、嚴(yán)格隨訪病例51例。疾病進(jìn)展時(shí)間(TTP)，B2型組較C型組復(fù)發(fā)時(shí)間更早，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p=0.032＜0.05)；無病生存時(shí)間(DFS)C型組優(yōu)于B2型組(p=0.034＜0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 1.本研究87例標(biāo)本，B2型37例，C型50例，未發(fā)現(xiàn)其他基因型。B2型HCC患者相對(duì)于C型年輕化，傾向于早期發(fā)??；而C型相對(duì)于B2型更為多發(fā)。
　　 2.B2型患者肝功能較C型差；兩種基因型在HBeA