低強(qiáng)度脈沖超聲對(duì)兔髕骨—髕腱連接點(diǎn)損傷后修復(fù)早期的蛋白質(zhì)組影響.pdf

1、目的：利用蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)，獲取低強(qiáng)度脈沖超聲(Lowintensity pulsed ultrasound stimulations，LIPUS)治療組與對(duì)照組兔髕骨-髕腱新生復(fù)合體的蛋白質(zhì)雙向凝膠電泳圖譜，比較兩組間蛋白質(zhì)表達(dá)譜的差異，鑒定差異蛋白質(zhì)并進(jìn)行初步功能分析，探討LIPUS對(duì)骨腱連接點(diǎn)損傷后修復(fù)早期的分子機(jī)制。
　　 方法：成熟的新西蘭兔16只，體重2.5±0.5kg，建立兔髕骨-髕腱損傷動(dòng)物模型。隨機(jī)分成兩組:(1

2、) LIPUS治療組（T組，n=8）;(2)對(duì)照組（C組，n=8）。治療組動(dòng)物于術(shù)后第3天開(kāi)始LIPUS治療，每天1次，每次20min;對(duì)照組在同樣時(shí)間點(diǎn)予以LIPUS模擬治療（無(wú)超聲信號(hào)）。分別于治療1天、3天后收集兔髕骨-髕腱新生復(fù)合體，每個(gè)時(shí)間點(diǎn)動(dòng)物數(shù)各4只。使用蛋白質(zhì)裂解液提取髕骨-髕腱新生復(fù)合體的總蛋白，在檢測(cè)蛋白提取液的濃度后，用固相PH梯度雙向凝膠電泳法分離蛋白質(zhì)，考馬斯亮藍(lán)染色后掃描，獲取高清晰的蛋白質(zhì)圖譜;再用PDQu

3、est-8.0.1圖象分析軟件對(duì)比分析，得到并切取差異表達(dá)的蛋白質(zhì)斑點(diǎn);采用基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時(shí)間質(zhì)譜(MALDI-TOF-MS)進(jìn)行質(zhì)譜分析后獲取肽質(zhì)量指紋圖譜;利用MascotWizard分析軟件，在SWISS-PROT數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索鑒定差異蛋白質(zhì);并利用Western-blot技術(shù)對(duì)骨-腱損傷后修復(fù)早期與LIPUS治療相關(guān)的差異蛋白質(zhì)進(jìn)行驗(yàn)證;查閱文獻(xiàn)對(duì)檢索鑒定的差異蛋白質(zhì)進(jìn)行初步功能分析。
　　 結(jié)果：LIPUS治

4、療組和對(duì)照組的雙向凝膠電泳圖譜分辨率高，重復(fù)性好;圖譜分析后發(fā)現(xiàn)兩組間存在較明顯的差異。1天和3天組共鑒定出6個(gè)差異蛋白質(zhì)，分別是熱休克蛋白70、載脂蛋白A-I、肌酸肌酶、肌動(dòng)蛋白、血清前白蛋白、β血紅蛋白，這些差異蛋白質(zhì)在 LIPUS治療組的表達(dá)均較對(duì)照組增高。差異蛋白質(zhì)與組織損傷后早期修復(fù)相關(guān)，包括應(yīng)激保護(hù)、細(xì)胞骨架形成、炎性反應(yīng)等功能。
　　 結(jié)論：LIPUS可影響兔髕骨-髕腱損傷后修復(fù)早期的蛋白質(zhì)表達(dá)，從而可能影響其修復(fù)