維生素B12對(duì)宮內(nèi)發(fā)育遲緩大鼠腦損傷的干預(yù)研究.pdf

1、目的：通過(guò)孕鼠孕期低蛋白(6％蛋白)飲食法制造宮內(nèi)發(fā)育遲緩(IUGR)的大鼠腦損傷模型,孕期補(bǔ)充維生素B12,觀察仔鼠體格生長(zhǎng)規(guī)律、腦結(jié)構(gòu)變化及腦組織中髓鞘堿性蛋白(MBP)的動(dòng)態(tài)表達(dá),以探討孕期補(bǔ)充維生素B12對(duì)IUGR仔鼠腦損傷的影響。
　　方法：選取健康三月齡Sprague-Dawley(SD)大鼠56只,按照雌雄1:1的比例置于同一籠中交配。受孕成功的孕鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組(CC)和 IUGR實(shí)驗(yàn)組(S),再按孕期是否補(bǔ)充

2、維生素B12,將實(shí)驗(yàn)組隨機(jī)分為維生素B12干預(yù)組(SV)和非干預(yù)組(SC)。對(duì)照組(CC)母鼠自受孕后第1天開(kāi)始給予21％正常蛋白飲食,而IUGR組(S)母鼠自受孕后第1天開(kāi)始給予6％蛋白飲食,建立IUGR模型。同時(shí)維生素B12干預(yù)組(SV)母鼠自受孕后第1天開(kāi)始給予維生素B12150ug/d灌胃,直至分娩。仔鼠生后由母鼠哺乳喂養(yǎng),均給予母鼠21％正常蛋白飲食喂養(yǎng)、自由飲水。選擇生后1日齡、7日齡、14日齡和21日齡4個(gè)時(shí)間點(diǎn),每個(gè)時(shí)間

3、點(diǎn)每組10只仔鼠,測(cè)量仔鼠體重、頭臀長(zhǎng)及腦濕重,并對(duì)各個(gè)時(shí)間點(diǎn)仔鼠留取腦組織,HE染色觀察海馬結(jié)構(gòu)的變化,免疫組化半定量測(cè)定海馬組織中MBP的表達(dá)水平,取海馬用Western blot檢測(cè)海馬組織中髓鞘堿性蛋白(MBP)含量的動(dòng)態(tài)表達(dá),同時(shí)檢測(cè)母鼠分娩當(dāng)天及各個(gè)時(shí)間點(diǎn)仔鼠血清中維生素B12(VB12)、同型半胱氨酸(Hcy)的表達(dá)水平。
　　結(jié)果：⑴三組孕鼠所分娩的仔鼠IUGR發(fā)生率及圍產(chǎn)期死亡率比較:與對(duì)照組(CC)相比,SV、

4、SC組仔鼠IUGR發(fā)生率明顯升高(P<0.01),而SC組、SV組仔鼠IUGR發(fā)生率無(wú)明顯差異(P>0.05)。三組仔鼠圍產(chǎn)期死亡率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。⑵三組仔鼠體重、頭臀長(zhǎng)及腦重變化的動(dòng)態(tài)比較:與對(duì)照組(CC)相比,1日齡 IUGR組(SV、SC)仔鼠形體瘦小,體重、頭臀長(zhǎng)、腦濕重均降低(P<0.01),7日齡及14日齡時(shí),SV、SC組體重、頭臀長(zhǎng)、腦濕重仍落后于CC組(P<0.05),經(jīng)追趕生長(zhǎng),到21日齡時(shí),SV、S

5、C組體重、頭臀長(zhǎng)與CC組相比無(wú)明顯差異(P>0.05),但腦濕重仍存在差異(P<0.05)。IUGR組中,維生素B12干預(yù)組(SV)仔鼠在1日齡、7日齡、14日齡和21日齡時(shí)體重、頭臀長(zhǎng)、腦濕重均高于非干預(yù)組(SC),但差異并不顯著(P>0.05)。⑶三組大鼠海馬組織結(jié)構(gòu)HE染色的變化:1日齡時(shí),與對(duì)照組(CC)相比, IUGR組(S)仔鼠海馬神經(jīng)元細(xì)胞排列疏松、紊亂,部分細(xì)胞水腫明顯,出現(xiàn)空泡,核固縮細(xì)胞比較多,神經(jīng)元細(xì)胞數(shù)目減少。到

6、21日齡時(shí),IUGR組(S)細(xì)胞水腫逐步減輕,但細(xì)胞排列相對(duì)疏松、紊亂,細(xì)胞數(shù)目未見(jiàn)明顯增多。1日齡到21日齡,與 SC組比較,SV組仔鼠海馬神經(jīng)元細(xì)胞數(shù)目、出現(xiàn)空泡的細(xì)胞數(shù)目均較少,細(xì)胞排列形態(tài)相對(duì)致密、規(guī)則。⑷三組大鼠海馬組織中髓鞘堿性蛋白(MBP)的表達(dá)變化:三組海馬組織中MBP在1日齡、7日齡時(shí)均無(wú)明顯表達(dá),從14日齡時(shí)表達(dá)逐漸增加,21日齡時(shí)最強(qiáng);Western blot檢測(cè)也顯示同樣的表達(dá)趨勢(shì)。同樣,在14日齡和21日齡三組

7、中MBP的表達(dá),SC組表達(dá)最低,其次為SV組,CC組的表達(dá)最高。⑸三組孕鼠分娩后及仔鼠血清中維生素B12(VB12)、同型半胱氨酸(Hcy)水平:三組孕鼠分娩后,SV組 VB12水平高于SC、CC組(P<0.01),SC組孕鼠VB12水平低于CC組(P<0.01),而Hcy與VB12的表達(dá)趨勢(shì)相反(P<0.05);隨著日齡漸增加,1日齡到14日齡,各組仔鼠B12水平逐漸降低,Hcy水平逐漸升高,到21日齡時(shí)VB12下降、Hcy上升均不明

8、顯;SV組仔鼠VB12水平高于CC組、SC組(P<0.05),SC組仔鼠VB12水平低于CC組(P<0.05),同時(shí)仔鼠中Hcy與VB12的表達(dá)趨勢(shì)相反(P<0.05)。
　　結(jié)論：①孕期低蛋白(6％)喂養(yǎng)飲食法建立IUGR大鼠腦損傷模型,仔鼠腦重降低,海馬神經(jīng)元細(xì)胞數(shù)目減少、細(xì)胞排列疏松,制模可靠,效果比較理想。②IUGR仔鼠生后予正常喂養(yǎng),體格上可實(shí)現(xiàn)追趕生長(zhǎng),但神經(jīng)元數(shù)目、腦重及腦組織MBP的表達(dá)落后于正常仔鼠。③孕期補(bǔ)充維