海藻酸-殼聚糖包覆納米乳促進(jìn)胰島素口服吸收的研究.pdf

1、胰島素是治療糖尿病的一線藥物，然而作為水溶性大分子蛋白類藥物，其口服給藥一直是研究的熱點與難點。w/o微乳用于多肽蛋白類藥物口服給藥系統(tǒng)己被關(guān)注，它可以在一定程度上提高多肽和蛋白類藥物的口服生物利用度。但是其口服給藥后易在胃內(nèi)轉(zhuǎn)相造成藥物大量泄漏而被破壞;另一方面微乳中必須使用大量的表面活性劑和助表面活性劑，長期使用可能會對消化道產(chǎn)生一定的刺激性，從而引起身體的不適。本文中擬制備w/o/w型納米乳，減少表面活性劑的用量;并采用生物粘附材

2、料海藻酸鈉與殼聚糖對納米乳劑進(jìn)行包裹，保護(hù)乳劑在胃中的穩(wěn)定性，并增加其在腸道內(nèi)的滯留時間，提高口服生物利用度。
　　第一部分中制備海藻酸-殼聚糖包覆的納米乳，并對處方和制備工藝進(jìn)行了優(yōu)化，對其體外特征進(jìn)行了表征。通過兩步法制備w/o/w型復(fù)乳，油相為LabrafacCC，表面活性劑為磷脂(Lipoid S75)和司盤80，外水相中含有乳化劑CremorphorEL和海藻酸鈉。復(fù)乳經(jīng)過高壓均質(zhì)制成納米乳，之后加入CaCl2和殼聚糖進(jìn)

3、行交聯(lián)形成包覆納米乳。包覆納米乳的粒徑在488 nm左右，包封率最高可達(dá)52.3％。Zeta電位測定顯示包覆納米乳呈現(xiàn)負(fù)電性。圓二色譜掃描發(fā)現(xiàn)α螺旋與β折疊的特征峰與含量沒有發(fā)生變化，證實包覆納米乳制備過程中不會對胰島素的結(jié)構(gòu)造成破壞。通過測定胰島素在不同pH介質(zhì)中的泄露情況考察不同酸度介質(zhì)對于包覆納米乳交聯(lián)殼的破壞，在此基礎(chǔ)上考察了不同制劑在模擬胃液中的胰島素釋放情況。結(jié)果表明，在pH不低于2.5時，包覆納米乳可以維持自身完整性不被破

4、壞;模擬胃液釋放實驗的結(jié)果顯示海藻酸-殼聚糖包覆納米乳在禁食狀態(tài)胃液pH條件下可以很好地保護(hù)胰島素，減少其泄漏;普通覆納米乳與復(fù)乳內(nèi)水相中胰島素則會迅速釋放。
　　第二部分對海藻酸-殼聚糖包覆納米乳體內(nèi)降糖效果進(jìn)行了考察。分別給予正常大鼠(wistar)與糖尿病大鼠(GK)不同劑量的包覆納米乳和對應(yīng)制劑，測定藥理相對生物利用度。包覆納米乳呈現(xiàn)出較好的降糖效果，并具有呈現(xiàn)出一定的劑量依賴性;且在糖尿病模型大鼠體內(nèi)的降糖效果更明顯，具

5、有-定的長效作用。以25 IU/kg和50 IU/kg劑量灌胃給藥，在正常wistar大鼠體內(nèi)相對生物利用度分別為8.42％和5.72％，在GK糖尿病模型大鼠體內(nèi)相對生物利用度為8.19％和7.84％。而普通納米乳生物利用度接近于零。
　　第三部分中，對于海藻酸-殼聚糖包覆納米乳促進(jìn)胰島素口服吸收的機(jī)制進(jìn)行了初步考察。首先通過體外粘蛋白結(jié)合黏度試驗對包覆納米乳的生物粘附性進(jìn)行考察。實驗中發(fā)現(xiàn)，加入包覆納米乳與普通納米乳后體系黏度均

6、有不同程度的增加，隨著粘蛋白濃度的增大，黏度的增大量也隨之增加，包覆納米乳較普通納米乳的增大幅度也有顯著性差異。通過共聚焦顯微鏡可以看到給藥后2、4、6小時，包覆納米乳的滯留時間與滯留量明顯大于普通納米乳，更遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過胰島素溶液。給藥6小時后包覆納米乳在空腸段與回腸段處仍有大量滯留而普通納米乳已經(jīng)開始離開小腸段。結(jié)果表明本體系良好的生物粘附效果，對于胰島素口服生物利用度的提高也起到極其重要的作用。Caco-2細(xì)胞轉(zhuǎn)運實驗結(jié)果顯示，包覆納米

7、乳中胰島素的轉(zhuǎn)運量較胰島素溶液并沒有明顯變化;在杯狀細(xì)胞轉(zhuǎn)運實驗中胰島素溶液的轉(zhuǎn)運速率及轉(zhuǎn)運量甚至遠(yuǎn)高于包覆納米乳。因此，海藻酸-殼聚糖包覆納米乳促進(jìn)胰島素口服吸收并非依賴于打開細(xì)胞緊密連接提高制劑的細(xì)胞跨膜轉(zhuǎn)運，而是更多依賴于包覆殼的保護(hù)作用及包覆材料的生物粘附作用。包覆殼保護(hù)納米乳在消化道中不會反向、破乳，從而保護(hù)了內(nèi)水相的胰島素不被消化酶等破壞失活;海藻酸、殼聚糖的生物粘附作用增加了制劑在小腸腔中的滯留時間，胰島素通過納米乳在粘膜