鹽酸法舒地爾后適應(yīng)對(duì)大鼠心肌缺血再灌注損傷的保護(hù)研究.pdf

1、研究背景：
　　急性心肌梗死（AMI）是最危險(xiǎn)的急癥之一，再灌注是其最佳治療。但心肌缺血再灌注損傷（MI/RI）已經(jīng)成為影響心肌再灌注治療效果的主要因素，因此如何減輕 MI/RI對(duì)治療急性心肌梗死具有重要意義。先后有學(xué)者提出缺血預(yù)適應(yīng)（IPC）和缺血后適應(yīng)（IPost），成為減輕 MI/RI有價(jià)值的干預(yù)方式，然而其臨床應(yīng)用明顯受限。近來(lái)研究提示很多藥物如腺苷、緩激肽、促紅細(xì)胞生成素（EPO）等能激活I(lǐng)PC和IPost的相關(guān)信號(hào)通路

2、，起到減輕MI/RI的作用，這種藥物干預(yù)過(guò)程即稱(chēng)之為藥物后適應(yīng)（PPost）。由于PPost減輕MI/RI的方式方便、快捷，目前已經(jīng)成為臨床研究的熱點(diǎn)，是最具有臨床應(yīng)用前景的干預(yù)方式。既往研究提示：細(xì)胞凋亡是 MI/RI發(fā)生機(jī)制的重要環(huán)節(jié)，是心肌受損、心力衰竭發(fā)生、發(fā)展的重要因素。關(guān)于 MI/RI過(guò)程中細(xì)胞凋亡的發(fā)生機(jī)制尚未十分明確，目前的研究認(rèn)為心肌缺血再灌注導(dǎo)致中性粒細(xì)胞增多，線(xiàn)粒體能量合成障礙，Ca2+穩(wěn)態(tài)紊亂和大量自由基產(chǎn)生，是

3、導(dǎo)致細(xì)胞凋亡的主要原因。目前研究提示Rho/ROCK通路與MI/RI關(guān)系密切，Rho激酶在心肌細(xì)胞凋亡過(guò)程中具有相當(dāng)重要的作用，最近的研究表明， Rho/ROCK通路通過(guò)激活腫瘤抑制因子p53基因，使Bax（Bcl-2家族的促凋亡蛋白）表達(dá)增高，介導(dǎo)線(xiàn)粒體途徑引起心肌細(xì)胞凋亡，所以抑制 Rho激酶活性能夠減輕MI/RI。鹽酸法舒地爾作為Rho激酶抑制劑，可以通過(guò)與ATP競(jìng)爭(zhēng)Rho激酶催化區(qū)的ATP結(jié)合位點(diǎn)而抑制Rho激酶活性，因此我們推

4、斷其具有減輕MI/RI的保護(hù)作用。本實(shí)驗(yàn)將以此推斷展開(kāi)研究，既往動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究均是通過(guò)靜脈途徑方式給藥，本實(shí)驗(yàn)將以另外一種方式——模擬冠脈內(nèi)給藥途徑進(jìn)行研究。
　　目的：
　　1．建立大鼠在體心肌缺血再灌注模型，通過(guò)主動(dòng)脈根部模擬冠脈內(nèi)給藥，評(píng)估鹽酸法舒地爾對(duì)MI/RI的影響；
　　2．探討鹽酸法舒地爾影響MI/RI可能的機(jī)制。
　　方法：
　　本研究通過(guò)球囊墊扎法制作大鼠在體缺血再灌注模型；SD大鼠被隨機(jī)分

5、為假手術(shù)組、缺血再灌注組、缺血后適應(yīng)組、鹽酸法舒地爾組、鹽酸法舒地爾+PI3K抑制劑組；各組于再灌注180 min后處死大鼠，分別測(cè)定心功能參數(shù)、血漿心肌酶譜、細(xì)胞凋亡指數(shù)和心肌梗死范圍；用Western Blot方法測(cè)定Bcl-2、Bax、Caspase-3、Akt及P-Akt在心肌組織中的表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　本研究發(fā)現(xiàn)鹽酸法舒地爾組與缺血再灌注組比較，心功能參數(shù)明顯改善（P＜0.05），血漿心肌酶含量明顯下降（P＜0

6、.05），心肌細(xì)胞凋亡指數(shù)和梗死范圍明顯降低（P＜0.05）；而鹽酸法舒地爾組與缺血后適應(yīng)組比較，上述結(jié)果無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05），提示鹽酸法舒地爾減輕MI/RI的作用類(lèi)似缺血后適應(yīng)效應(yīng)，具有PPost效應(yīng)。但給予PI3K抑制劑LY-294002后，鹽酸法舒地爾藥物后適應(yīng)作用消失，即鹽酸法舒地爾+PI3K抑制劑組心功能參數(shù)、血漿心肌酶、心肌細(xì)胞凋亡、心肌梗死范圍與缺血再灌注組相似（P＞0.05），與鹽酸法舒地爾組比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（

7、P＜0.05）。此外，鹽酸法舒地爾組心肌組織中Bcl-2、P-Akt表達(dá)升高、Bax、Caspase-3表達(dá)降低（與缺血再灌注組比較 P＜0.05）；而鹽酸法舒地爾+PI3K抑制劑組心肌組織中 Bcl-2、P-Akt表達(dá)降低；Bax、Caspase-3表達(dá)升高（與鹽酸法舒地爾組比較P＜0.05），初步推斷鹽酸法舒地爾能夠通過(guò)激活PI3K-Akt途徑減輕MI/RI，需通過(guò)進(jìn)一步深入研究證實(shí)。
　　結(jié)論：
　　1．模擬冠脈內(nèi)注射