Nrf2-ARE通路在大鼠心肌細(xì)胞缺血-吡那地爾后處理中作用的研究.pdf

1、目的：建立成年大鼠心肌細(xì)胞缺氧復(fù)氧模型，觀察缺血后處理和吡那地爾后處理對(duì)鼠心肌細(xì)胞的影響，并探討Nrf2-ARE通路在缺血/吡那地爾后處理心肌保護(hù)中的作用。
　　 方法：
　　 1.建立Langendorff離體心臟灌注模型，分離、培養(yǎng)成年大鼠心肌細(xì)胞，并將其隨機(jī)分為正常組(N組)、對(duì)照組(C組)、缺血后處理組(IPO組)和吡那地爾不同濃度后處理組(25、50和100μM，P組)。分離后的心肌細(xì)胞培養(yǎng)20h，除N組持續(xù)培

2、養(yǎng)外，其余各組均缺氧45 min，復(fù)氧60 min。IPO組缺氧45 min后復(fù)氧、缺氧循環(huán)3次，每次各5 min，在繼續(xù)復(fù)氧60 min；P25、P50和P100組缺氧45 min后分別以25、50和100μM/L吡那地爾處理5 min，復(fù)氧60 min。
　　 2.電鏡觀察心肌細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)。
　　 3.熒光共聚焦顯微鏡觀察復(fù)氧末心肌細(xì)胞內(nèi)鈣。
　　 4.Real-Time PCR及Western blot技術(shù)

3、檢測(cè)復(fù)氧末心肌細(xì)胞中Nrf2、HO-1、NQO1和SOD1的基因mRNA轉(zhuǎn)錄及蛋白質(zhì)表達(dá)情況。
　　 結(jié)果：
　　 1.電鏡觀察心肌細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)：N組超微結(jié)構(gòu)形態(tài)基本正常；IPO組、P25組、P50組、和P100組優(yōu)于C組，其中IPO組和P50組優(yōu)于P25組和P100組。
　　 2.熒光共聚焦顯微鏡檢測(cè)心肌細(xì)胞內(nèi)鈣：與N組比較，其他各組熒光強(qiáng)度明顯增強(qiáng)(P<0.05)；與C組比較，其他各組熒光強(qiáng)度明顯減弱(P<0

4、.05)，其中IPO和P50組熒光強(qiáng)度明顯低于比P25和P100組(P<0.05)，IPO與P50組相比，差異不顯著(P>0.05)，而P25組熒光強(qiáng)度低于P100組(P<0.05)。
　　 3.Nrf2、HO-1、NQO1及SOD1 mRNA表達(dá)量：與N組相比，其他各組與Nrf2、NQO1、SOD1及HO-1基因mRNA轉(zhuǎn)錄量明顯降低(P<0.05)；與C組相比，其他各組基因mRNA轉(zhuǎn)錄量顯著增高(P<0.05)；其中IPO和

5、P50組基因mRNA轉(zhuǎn)錄量顯著高于P25和P100組(P<0.05)；P25與P100組Nrf2、HO-1和NQO1的基因mRNA轉(zhuǎn)錄無(wú)顯著差異(P>0.05)，P25組SOD1基因mRNA轉(zhuǎn)錄量顯著高于P100組(P<0.05)。
　　 4.Nrf2、HO-1、NQO1及SOD1蛋白質(zhì)表達(dá)量：與N組相比，其余各組Nrf2、HO-1、NQO1和SOD1蛋白質(zhì)表達(dá)量顯著降低(P<0.05)；與C組相比，其余各組蛋白質(zhì)表達(dá)量增高(P

6、<0.05)；其中P50組和IPO組Nrf2、SOD1、NQO1蛋白質(zhì)表達(dá)量顯著高于P25和P100組(P<0.05)；IPO與P50組蛋白質(zhì)表達(dá)量比較，無(wú)顯著差異(P>0.05)；P50組HO-1蛋白質(zhì)表達(dá)量顯著高于IPO組、P25和P100組(P<0.05)；P25組HO-1和NQO1蛋白質(zhì)表達(dá)量顯著高于P100組(P<0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 1.缺血、不同濃度吡那地爾后處理均能夠減少心肌細(xì)胞內(nèi)鈣，起到保護(hù)