瀘州市兒童β地中海貧血基因突變類型研究.pdf

1、目的:地中海貧血是由于血紅蛋白基因的突變導(dǎo)致珠蛋白鏈的合成不平衡所造成的一類常見(jiàn)的單基因遺傳性、溶血性疾病，包括α地中海貧血和β地中海貧血兩種類型，是世界上最常見(jiàn)和發(fā)病率最高的遺傳性溶血性貧血，也是危害最嚴(yán)重的血紅蛋白病之一。在國(guó)外以地中海沿岸國(guó)家和東南亞各國(guó)多見(jiàn)，我國(guó)以廣東、廣西、海南、四川等?。ㄗ灾螀^(qū)）較常見(jiàn)。本病具有高度的遺傳異質(zhì)性和極大的地域民族差異，不同地區(qū)人群的發(fā)病率和基因背景差異均很大，因此，研究這些變化特征可為本病的預(yù)防

2、及診斷提供科學(xué)依據(jù)。本課題通過(guò)了解瀘州市β地中海貧血的基因突變類型及構(gòu)成比，為本地區(qū)地中海貧血的診斷和預(yù)防提供理論依據(jù)，同時(shí)探討基因診斷在地中海貧血中的重要作用。
　　方法:1.全部病例來(lái)源為2011年1月至2013年6月在瀘州醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院兒科門(mén)診（包括兒保門(mén)診）及住院部就診兒童。2.所有病例均進(jìn)行血常規(guī)檢查，篩查出的血紅蛋白(Hb)＜110g/L，紅細(xì)胞平均容積(MCV)＜80fl或紅細(xì)胞平均血紅蛋白(MCH)＜27pg的小細(xì)

3、胞低色素貧血患兒，進(jìn)一步做血紅蛋白電泳檢測(cè)。3.血紅蛋白電泳檢測(cè)結(jié)果中判為β地中海貧血表型陽(yáng)性者，即MCV＜80％，HbA2＞3.2％或HbF＞3.1％，進(jìn)行β地貧基因檢測(cè)。4.用聚合酶鏈反應(yīng)(polymerase chain reaction，PCR)結(jié)合反向斑點(diǎn)雜交技術(shù)(reverse dot blot，RDB)檢測(cè)常見(jiàn)β-珠蛋白基因上的17個(gè)位點(diǎn)突變，包括CD41-42(-TTCT)、 IVS-Ⅱ-654(C＞T)、-28(A＞G

4、)、 CD71-72(+A)、 CD17(AAG＞TAG)、βE(GAG→AAG)、 CD31(-C)、CD43(GAG＞TAG)、-32(C＞A)、-29(A＞G)、-30(T＞C)、CD14-15(+G)、 CAP+40-43(-AAAC)、起始密碼子Int(ATG＞AGG)、CD27/28(+C)、 IVS-Ⅰ-1(G＞T)、IVS-Ⅰ-5(G＞C)。首先制備DNA標(biāo)本，通過(guò)PCR擴(kuò)增、雜交、洗膜等步驟，最后顯色觀察結(jié)果，膜條有藍(lán)

5、色雜交斑點(diǎn)為陽(yáng)性結(jié)果。
　　結(jié)果:1.在進(jìn)行地貧基因檢查的114例β-地貧表型陽(yáng)性兒童中，檢測(cè)到β地貧基因突變者72例，占總檢測(cè)對(duì)象的63.16％。2.72例β-地貧中共檢出7種基因突變位點(diǎn)，分別為CD41-42(-TTCT)、 IVS-Ⅱ-654(C＞T)、 CD17(AAG＞TAG)、-28(A＞G)、 CD71-72(+A)、β E(GAG→AAG)、-32(C＞A)。其中以CD17(AAG＞TAG)、 IVS-Ⅱ-654(

6、C＞T)、CD41-42(-TTCT)3種基因型最為常見(jiàn)，占90.22％。3.基因突變組成15種基因型，包括52例雜合子(72.22％)、13例雙重雜合子(18.05％)、3例三重雜合子(4.17％)和4例純合子(5.56％)。雜合子基因型分別為:CD17(27.78％)、 IVS-Ⅱ-654(22.22％)、 CD41-42(19.44％)和-28(2.78％)。雙重雜合子基因型分別為:IVS-Ⅱ-654/CD17(8.33％)、 C

7、D41-42/CD17(2.78％)、-28/CD17(1.39％)、 CD41-42/CD71-72(1.39％)、 CD41-42/βE(1.39％)、CD41-42/IVS-Ⅱ-654(1.39％)、CD41-42/-32(1.39％)。三重雜合子基因型分別為:IVS-Ⅱ-654+CD17/-32(2.78％)、 CD41-42+IVS-Ⅱ-654/-28(1.39％)。純合子基因型為:CD41-42/CD41-42(2.78％)