牛奶中青霉素殘留的微生物學(xué)檢測(cè)技術(shù)研究及應(yīng)用.pdf

1、青霉素是獸醫(yī)臨床上廣泛使用的一類(lèi)抗生素，一般采用乳房?jī)?nèi)注射的用藥途徑來(lái)治療和預(yù)防奶牛的乳腺炎，而由此引起的牛奶中青霉素殘留是一個(gè)全球性的問(wèn)題。由于牛奶中青霉素殘留對(duì)消費(fèi)者健康的危害及青霉素耐藥性菌株的產(chǎn)生，對(duì)牛奶中青霉素殘留的檢測(cè)和控制是目前世界各國(guó)政府所關(guān)注的問(wèn)題。而目前我國(guó)對(duì)牛奶中青霉素殘留檢測(cè)的方法的靈敏度達(dá)不到我國(guó)對(duì)牛奶中青霉素殘留的最高殘留限量的要求，有必要對(duì)牛奶中青霉素殘留的檢測(cè)方法進(jìn)行研究，以達(dá)到世界先進(jìn)水平。 本

2、論文主要研究了當(dāng)前國(guó)外先進(jìn)的牛奶中青霉素殘留的檢測(cè)方法，并建立牛奶中青霉素殘留的微生物檢測(cè)技術(shù)，且應(yīng)用于我國(guó)的殘留監(jiān)控計(jì)劃中去，推動(dòng)我國(guó)牛奶中青霉素殘留檢測(cè)技術(shù)與國(guó)際接軌，保證國(guó)內(nèi)牛奶安全和消費(fèi)者的身體健康。 目前國(guó)外常用的牛奶中青霉素殘留檢測(cè)的微生物學(xué)檢測(cè)方法有微生物抑制法、微生物受體法和酶比色法。微生物抑制法有嗜熱脂肪芽胞桿菌紙片法、戴爾沃-p法、戴爾沃-p-多項(xiàng)測(cè)試法、CHARM抑制法、CHARM農(nóng)場(chǎng)測(cè)試法、嗜熱鏈球菌Va

3、lioT101法、亮黑還原法、藤黃微球菌法、三磷酸腺苷法、三碟法、六碟法等，而微生物受體法主要是CHARMⅡ法，酶比色法主要是Penzyme法。 本論文建立了嗜熱脂肪芽胞桿菌紙片法和CHARMⅡ法，用于檢測(cè)牛奶中的青霉素殘留。CHARMⅡ法采用3H或14C標(biāo)記的青霉素和牛奶中的青霉素殘留在細(xì)菌表面的特異性受體位點(diǎn)進(jìn)行競(jìng)爭(zhēng)，樣品經(jīng)離心除去上清液，沉淀在閃爍液重新懸浮，用液體閃爍計(jì)數(shù)器來(lái)測(cè)量其放射性，然后將樣品的放射性與判定點(diǎn)比較，

4、樣品的放射強(qiáng)度與樣品中殘留物的含量成反比。此法的檢測(cè)限為2ppb，檢測(cè)時(shí)間為15分鐘。嗜熱脂肪芽胞桿菌紙片采用嗜熱脂肪芽胞桿菌作為測(cè)試菌株，培養(yǎng)溫度為55±2℃，并對(duì)牛奶樣品進(jìn)行82±2℃加熱處理，以去除牛奶中存在的干擾物質(zhì)，方法的檢測(cè)限為4ppb，檢測(cè)時(shí)間為3-4小時(shí)，并采用青霉素酶法對(duì)青霉素殘留進(jìn)行初步確認(rèn)。 這二個(gè)方法檢測(cè)限和精密度均能達(dá)到我國(guó)對(duì)牛奶中青霉素殘留監(jiān)控的最高殘留限量的要求，并應(yīng)用于國(guó)家殘留監(jiān)控計(jì)劃中去，200