KH902溶劑對人晶狀體上皮細胞的作用.pdf

1、目的：KH902是一種新研制出的眼科基因工程藥物，通過玻璃體腔內(nèi)注射用于治療視網(wǎng)膜新生血管。本實驗觀察配制KH902的6組不同的溶劑對人晶狀體上皮細胞(HLEC)(SRAOI/04)的影響，為藥物配制中溶劑的選擇提供實驗依據(jù)。 方法：根據(jù)前期實驗結(jié)果選擇6組用于KH902配制的溶劑，分別為：A組：10mMhistidine+9％trehalose+0.05％Tween.20；B組： 10mM succinate+9％trehal

2、ose+0.05％Tween-20；C組：50mM PB+0.05％Tween-20；D組：10mM succinate+9％trehalose+0.05％Tween.20+6％甘露醇；E組：10mMsuccinate+9％trehalose+0.05％Tween.20+0.6％甘露醇；F組：PBS。將上述溶劑分別加入培養(yǎng)的HLEC，進行下列觀察和檢測： 1.用倒置生物相差顯微鏡對細胞生長情況進行觀察和記錄； 2.用免疫

3、組化法檢測Bax、Bcl-2在細胞中的表達，用乳腺癌細胞作為陽性對照； 3.用四甲基偶氮唑鹽(MTT)比色法進行細胞活性的檢測，設(shè)加培養(yǎng)基組為正常對照組； 4.用流式細胞術(shù)(FCM)檢測特異性抗體Ap02.7標記的HLEC的凋亡率，用H202誘導凋亡的HLEC作為陽性對照。 結(jié)果： 1.細胞生長情況顯示：在D組細胞死亡明顯。 2.免疫組化結(jié)果顯示：在各組溶劑作用5天后，Bax表達分級的順序為：D組

4、>A組、B組、F組>C組、E組；Bcl-2表達分級的順序為：C組、E組>A組、B組、D組>F組。 3.MTT結(jié)果顯示：在一周的培養(yǎng)時間中，與正常對照組比較，D組溶劑對細胞生長有抑制作用；各溶劑組間相互比較，D組作用的細胞活性降低最明顯。各溶劑組作用的細胞活性在第5-7天出現(xiàn)降低。 4.流式細胞術(shù)檢測Ap02.7的結(jié)果顯示：在各組溶劑作用5天后，Ap02.7標記的HLEC的凋亡率大小次序為陽性對照組>D組>F組>A組、B組

5、>E組>C組，即D組作用的HLEC凋亡率最高，C組的最低， A、B組的凋亡率差異無統(tǒng)計學意義。 結(jié)論：在六組KH902的溶劑中，C組(50mMPBS+0.05％Tween.20)對HLEC的生長抑制作用和促凋亡作用最小，宜選用；D組(10mM Succinate+9％trehalose+0.05％Tween-20+6％甘露醇)對體外培養(yǎng)的HLEC有明顯抑制生長和導致凋亡的作用，不宜選用。Ap02.7能夠檢測出早期凋亡的HLEC，