單側輸尿管梗阻大鼠腎臟TGF-β受體亞型表達的變化.pdf

1、目的：探討轉化生長因子-β（TGF-β）Ⅰ型受體、Ⅱ型受體以及下游Smad蛋白在單側輸尿管梗阻（UUO）大鼠模型腎臟中表達及意義。 方法：90只雌性Wistar大鼠隨機分為正常對照組（CON組）、假手術組（SOR組）和單側輸尿管梗阻組（UUO組），分別于術后1d、3d、7d、14d、21d處死，觀察各組大鼠腎功能變化；PAS染色觀察大鼠腎間質病理形態(tài)改變；采用定時定量PCR基因芯片分析正常大鼠和不同分期腎間質纖維化大鼠腎組織TG

2、F-βⅠ，Ⅱ型受體亞型表達，觀察其豐度變化，結合腎組織的病理改變，篩選出有病理生理意義的TGF-βⅠ，Ⅱ型受體亞型。進一步應用Real-time PCR，Western blot，和免疫熒光檢測篩選出的TGF-β受體亞型mRNA和蛋白在腎間質纖維化大鼠腎組織的分布和表達。 結果：隨時間延長，UUO組大鼠的血肌酐，血尿素氮與CON組比較均于術后第7天出現(xiàn)升高，并隨梗阻時間延長逐漸增加，于21天達到最高峰（P<0．01）。腎組織病理

3、PAS染色可見UUO組腎臟隨梗阻時間延長，腎小管萎縮、擴張、炎細胞浸潤加重；基因芯片結果顯示：與對照組相比，輸尿管梗阻組腎組織TGF-βⅠ型受體ALK-5、ALK-6、ALK-7、TGF-βⅡ型受體TGFβRⅡ，Smad2/3、p-Smad2/3的mRNA表達出現(xiàn)顯著變化。Real-time PCR結果：ALK-5，ALK-7，TGFβRⅡ的mRNA表達于術后第3d出現(xiàn)上升并隨梗阻時間延長逐漸增加（P<0．05），于14天達到最高峰（P

4、<0．01），在第21天有所回落。蛋白水平檢測：ALK-5、ALK-7、TGFBRⅡ蛋白水平表達與基因水平表達一致。ALK-6蛋白水平表達于術后第3d即出現(xiàn)下降并隨梗阻時間延長逐漸減少（P<0．05），于14天達到最低峰（P<0．01），在第21天有所回升。Smad2/3、p-Smad2/3蛋白表達于術后第3d出現(xiàn)上升并隨梗阻時間延長逐漸增加（P<0．05），于14天達到最高峰（P<0.01），在第21天有所回落。免疫熒光結果顯示ALK

5、-5、ALK-6、ALK-7、TGFBRⅡ蛋白在CON組中主要分布在腎小管及腎間質，腎小球內基本無表達。在UUO組，ALK-5、ALK-7、TGFβRⅡ、Smad2/3、TGFβRⅡ蛋白表達隨著梗阻時間延長呈進行性上升（P<0.05），于14天達到最高峰（P<0.01），在第21天有所回落。ALK-6蛋白表達呈進行性下降（P<0.05），于14天達到最低（P<0.01），在第21天有所回升。 結論：在腎間質纖維化進展中TGF-p