曼氏裂頭蚴感染診斷的病原鑒定方法研究.pdf

1、目的：系統(tǒng)觀察和分析曼氏裂頭蚴的解剖組織學(xué)和組織病理學(xué)用以補(bǔ)充對(duì)該病原診斷基礎(chǔ)的不足;探索檢測(cè)切片中曼氏裂頭蚴抗原和基因的方法用以解決病理切片中不能確定蟲種的鑒定技術(shù)問(wèn)題。
　　方法：收集來(lái)自青蛙和病人的曼氏裂頭蚴標(biāo)本42個(gè)、來(lái)自動(dòng)物的其他蠕蟲標(biāo)本13個(gè)和人體組織標(biāo)本2個(gè)。用倒置顯微鏡比較觀察裂頭蚴各部位的解剖結(jié)構(gòu)組織學(xué)特征;福爾馬林固定和石蠟包埋的曼氏裂頭蚴切片標(biāo)本，對(duì)HE染色的蟲體不同部位組織學(xué)進(jìn)行比較觀察;制備曼氏裂頭蚴免疫

2、血清，用間接酶免疫組化法比較檢測(cè)不同蟲種切片組織中抗原;設(shè)計(jì)作曼氏裂頭蚴mtDNACOX1基因部分片斷檢測(cè)的引物4對(duì)，用商品化試劑分別提取數(shù)種蠕蟲基因組DNA作PCR，取擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)電泳觀察目的條帶，并測(cè)序，用blast軟件分析其與已知基因序列的符合率。
　　結(jié)果：曼氏裂頭蚴顯微解剖組織學(xué)特征為:頭部吸槽內(nèi)具囊腔;體壁具凹凸橫皺褶;體內(nèi)實(shí)質(zhì)呈網(wǎng)狀纖維結(jié)構(gòu)，富含石灰小體，在體中后部可見排泄小管;從蟲體劃破處可見有大量的呈圓形或橢圓形、

3、無(wú)細(xì)胞結(jié)構(gòu)的強(qiáng)折光盤狀體溢出，即石灰小體，其個(gè)體明顯比體細(xì)胞大。曼氏裂頭蚴組織病理學(xué)特征為:可因切取部位不同而有差異;頭部形態(tài)最不規(guī)則，其橫切面可見囊腔和成石灰小體;體部和尾部斷面較大;體部的不同切面在組織結(jié)構(gòu)上有差異;除頭部外，蟲體各斷面的共同特征為體壁具凹凸不等的橫皺褶，皮層較厚呈嗜伊紅深染，有的皮層外可見長(zhǎng)短不一微毛，體內(nèi)為網(wǎng)狀疏松的實(shí)質(zhì)組織，無(wú)體腔和消化器官結(jié)構(gòu)，可見分散的肌纖維和圓形，橢圓形或不規(guī)則形石灰小體，亦可見排泄管腔;

4、在病理切片9例中有5例在蟲體組織內(nèi)未見典型的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)（呈鈣化變性），石灰小體和肌纖維束結(jié)構(gòu)不典型。用酶免疫組化法最佳條件，對(duì)已知并殖吸蟲、豬囊尾蚴和曼氏裂頭蚴的組織切片檢測(cè)均未出現(xiàn)假陰性和假陽(yáng)性，對(duì)12例臨床來(lái)源的病理切片中裂頭蚴檢測(cè)均呈陽(yáng)性反應(yīng)。在基因擴(kuò)增用的4對(duì)引物中，有兩對(duì)（F650/ R800和F965/R1120）可檢出曼氏裂頭蚴特異性目的條帶。
　　結(jié)論：本研究描述的曼氏裂頭蚴顯微解剖組織學(xué)特征與其觀察方法為病理學(xué)對(duì)石