云南傣族原發(fā)性高血壓易感基因的初步研究.pdf

1、原發(fā)性高血壓是一種嚴(yán)重危害人類健康的心血管系統(tǒng)疾病。近35年來高血壓在云南傣族中的患病率顯著上升，探索云南傣族中原發(fā)性高血壓的易感基因以及等位基因之間的相互作用，有助于揭示傣族原發(fā)性高血壓的發(fā)病機(jī)制、進(jìn)一步闡明環(huán)境選擇因素、遺傳因素和疾病三者的相互作用和關(guān)系。
　　由于原發(fā)性高血壓高度的遺傳異質(zhì)性，原發(fā)性高血壓的關(guān)聯(lián)基因在不同群體中會有所不同。其他人群中已報道的候選基因在傣族群體中與高血壓的關(guān)系還不清楚。對這些基因進(jìn)行研究有助于我

2、們找出傣族原發(fā)性高血壓的相關(guān)致病基因，揭示發(fā)病機(jī)制。鈉離子作為重要的環(huán)境因素與高血壓的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。根據(jù)對傣族飲食習(xí)慣的了解，對傣族的鈉離子敏感候選基因進(jìn)行研究，是探索傣族近35年來高血壓患病率明顯增高的分子機(jī)制的切入點(diǎn)。
　　原發(fā)性高血壓是多基因遺傳疾病，其遺傳機(jī)制依賴于多個微效基因的共同作用，基因間存在的上位效應(yīng)將對高血壓發(fā)病產(chǎn)生影響，但目前此類研究還較少。分析兩個候選基因的上位效應(yīng)可以為高血壓易感基因研究提供更多的線索。

3、根據(jù)高血壓調(diào)節(jié)的生物學(xué)過程，本研究選擇腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)中的基因及與該代謝途徑相關(guān)的基因進(jìn)行關(guān)聯(lián)分析及基因位點(diǎn)的上位效應(yīng)分析。
　　本研究首先對運(yùn)用DNA池焦磷酸測序法初步篩選候選位點(diǎn)進(jìn)行方法學(xué)研究，然后基于DNA池焦磷酸測序法初步篩選的候選位點(diǎn)，選取云南傣族425例正常對照樣本及412例原發(fā)性高血壓患者樣本，采用SNaPshot單堿基延伸測序法、Taqman探針法、PCR-長度多態(tài)法和基因測序這幾種基因分型方法對ADD

4、1、ACE和CYP11B2三個基因的7個熱點(diǎn)多態(tài)性位點(diǎn)(ADD1_ rs4963、ADD1_ rs4961、ADD1_ rs12503220、ACE_rs4291、ACE_rs4343、ACE_I/D、CYP11B2_ rs1799998)進(jìn)行逐一個體基因分型，再進(jìn)一步研究ACE和ADD1這兩個候選基因與高血壓的關(guān)系及多態(tài)性位點(diǎn)之間可能存在的上位效應(yīng)作用。
　　利用已知頻率位點(diǎn)建立優(yōu)化DNA池焦磷酸測序法并進(jìn)行高通量基因分型，對所

5、得結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計分析和關(guān)聯(lián)分析，結(jié)果顯示，DNA池焦磷酸測序法可初步測定群體中高頻率及非復(fù)雜性的SNPs等位基因頻率，與SNaPshot法逐一分型所得頻率誤差在0.9％-2.3％之間，DNA池焦磷酸測序法對等位基因頻率估計較為準(zhǔn)確。在傣族群體中，我們所選擇的7個高血壓候選位點(diǎn)經(jīng)過x2檢驗(yàn)并進(jìn)行Bonferroni統(tǒng)計學(xué)校正后，沒有發(fā)現(xiàn)傣族高血壓關(guān)聯(lián)位點(diǎn)。進(jìn)行上位效應(yīng)分析結(jié)果顯示，單個位點(diǎn)多態(tài)性與高血壓相關(guān)性不明顯，但將功能相關(guān)基因進(jìn)行上位

6、效應(yīng)分析后，與高血壓相關(guān)性顯著增強(qiáng)。ACE基因缺失(D)與ADD1基因的G等位基因聯(lián)合出現(xiàn)時，高血壓患病風(fēng)險顯著增加(p=0.0014，OR=1.567，95％CI:1.189-2.067);ACE基因缺失(D)與CYP11B2基因的T等位基因聯(lián)合出現(xiàn)時，高血壓風(fēng)險顯著增加（p=1.58E-08，OR=2.320，95％CI:1.728-3.116）。即在顯性-顯性模式下ACE-D/ADD1-G和ACE-D/CYP11B2-T上位效應(yīng)均

7、為傣族原發(fā)性高血壓風(fēng)險因素。Logist回歸分析的研究結(jié)果顯示年齡、BMI、總膽固醇、飲酒等因素也與高血壓發(fā)病相關(guān)聯(lián)。排除這些影響因素作用后，本研究中的上位效應(yīng)仍與高血壓關(guān)聯(lián)顯著。綜上，本研究首先進(jìn)行了方法學(xué)方面的研究，結(jié)果顯示，DNA池焦磷酸測序法適用于中頻和高頻的非復(fù)雜性SNPs關(guān)聯(lián)分析，運(yùn)用該方法篩選候選基因，可快速得到混合樣本等位基因頻率;本研究的7個候選位點(diǎn):ADD1_ rs4963、ADD1_ rs4961、ADD1_rs1

8、2503220、ACE_ rs4291、ACE_ rs4343、ACE_ I/D、CYP11B2 rs1799998與傣族原發(fā)性高血壓沒有顯著關(guān)聯(lián)性，但ACE-D與ADD1-G及ACE-D與CYP11B2-T間存在上位效應(yīng)，并且二者的上位效應(yīng)均與傣族原發(fā)性高血壓有顯著關(guān)聯(lián)性;另外，環(huán)境因素如BMI，總膽固醇，飲酒等也與傣族原發(fā)性高血壓有顯著關(guān)聯(lián)性。
　　本研究顯示，高血壓關(guān)聯(lián)基因有群體差異，不同人群地區(qū)高血壓發(fā)病機(jī)制有所不同。在易