苗藥頭花蓼對幽門螺桿菌感染小鼠G、D細胞的影響.pdf

1、目的：建立幽門螺桿菌（Helicobacter pylori,Hp）SS2000(Sydney strain2000)感染 C57BL/6小鼠動物模型，比較苗藥頭花蓼各劑量組以及與阿莫西林聯(lián)用時對Hp慢性胃炎小鼠胃粘膜的Hp清除作用和修復(fù)保護作用，通過研究頭花蓼對Hp感染小鼠胃粘膜內(nèi)分泌細胞G、D細胞和GAS mRAN、SS mRNA的影響，探討頭花蓼保護修復(fù)Hp所致的胃粘膜損傷的作用機理，為臨床治療Hp慢性胃炎及新藥的研發(fā)提供實驗依據(jù)

2、。
　　方法：(1)瓊脂稀釋法檢測苗藥頭花蓼對Hp悉尼株SS2000的最低抑菌濃度（Minimal inhibitory concentration，MIC）。(2)將110只無特定病原體（specific pathogen free SPF）級C57BL/6小鼠隨機分為模型組（90只）和空白組（20只），造模組以每只小鼠0.5mL Hp SS2000菌液進行灌胃處理，間隔1d，共5次，空白組小鼠灌胃等量無菌腦心浸液肉湯，末次菌液

3、灌胃8w后處死空白組和造模組各10只小鼠，觀察Hp感染小鼠模型是否構(gòu)建成功。(3)成功建模后將造模組小鼠隨機分為8組（10只/組），分別進行高、中、低劑量的頭花蓼和高、中、低劑量頭花蓼聯(lián)合阿莫西林（作為中西結(jié)合高、中、低劑量組）及三聯(lián)藥物和生理鹽水（模型組）灌胃治療，每天灌胃1次，連續(xù)2w，停藥4w后處死所有組小鼠，用胃粘膜快速尿素酶試驗、細菌微需氧培養(yǎng)和Giemsa染色評定各組藥物對 Hp的清除效果；HE染色判斷藥物對胃粘膜是否有保護

4、修復(fù)作用；胃粘膜免疫組織化學(xué)染色和圖像分析軟件（Image-Pro-Plus，IPP）檢測治療前后胃粘膜G細胞、胃泌素（Gastrin，GAS）灰度值和D細胞、生長抑素（Somatostatin，SS）灰度值的變化，提取胃粘膜組織的RNA，采用實時熒光定量PCR（real-time fluorescence quantification polymerase chain reaction，real-time PCR）分析給藥前后GAS、

5、SS mRNA的表達差異。
　　結(jié)果：(1)苗藥頭花蓼對Hp SS2000的體外抑菌活性MIC=4mg/mL；(2)接種Hp后8w，模型組小鼠胃胃粘膜Hp定植率為100％，HE染色結(jié)果顯示模型組小鼠胃粘膜均呈現(xiàn)慢性炎癥改變，證實Hp感染小鼠慢性胃炎的動物模型構(gòu)建成功。(3)治療后小鼠胃粘膜幽門螺桿菌定植密度降低，其中中西結(jié)合高、中劑量組對Hp的清除作用明顯，與模型組比較有顯著意義（P＜0.05），三聯(lián)組可根除Hp；治療后胃粘膜的炎

6、癥浸潤程度減輕，頭花蓼高劑量組和三聯(lián)組胃粘膜炎癥改善效果明顯，與模型組比較，均具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。（4）Hp感染后小鼠胃粘膜的G細胞和GAS灰度值明顯增多（P＜0.05），GAS mRNA表達顯著上調(diào)（P＜0.05），D細胞和SS灰度值輕度增加，SS mRNA表達上調(diào)明顯（P＜0.05）。治療后，頭花蓼高、中劑量組和中西藥結(jié)合高、中劑量組G細胞和GAS灰度值降低明顯，GAS mRNA下調(diào)顯著，與模型組比較，有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜

7、0.05）。頭花蓼組和中西結(jié)合高、中劑量組及三聯(lián)組治療后，D細胞與SS灰度值下降不明顯，SS mRNA下調(diào)顯著（P＜0.05）；中西結(jié)合低劑量組D細胞及SS灰度值明顯降低（P＜0.05）。
　　結(jié)論：
　　1.頭花蓼對Hp SS200具有較好的抑菌活性，MIC為4mg/mL。
　　2.Hp感染可導(dǎo)致胃粘膜受損，刺激G細胞分泌GAS，上調(diào)胃粘膜GAS mRNA的表達；反饋調(diào)節(jié)D細胞分泌SS輕度增加，SS mRNA表達上調(diào)