牙齦卟啉單胞菌菌毛fimA基因的克隆及表達(dá)純化.pdf_第1頁(yè)
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1、目的：牙齦卟啉單胞菌(Porphyromonas gingivalis，Pg)是慢性牙周炎病變區(qū)域或活動(dòng)部位最主要的優(yōu)勢(shì)菌，該菌通過(guò)其主要黏附因子菌毛蛋白A(fimbria proteinA,FimA)黏附并入侵牙齦上皮細(xì)胞，與Pg毒力密切相關(guān)；同時(shí)FimA是Pg的表面抗原成分，具有良好的免疫反應(yīng)性。本實(shí)驗(yàn)克隆了牙齦卟啉單胞菌菌毛蛋白fimA基因，使其在大腸桿菌中正確表達(dá)，純化，旨在為研制增強(qiáng)免疫應(yīng)答的高效牙周炎真核表達(dá)質(zhì)粒提供抗原。<

2、br>　　 方法：利用PCR 方法克隆牙齦卟啉單胞菌fimA基因，構(gòu)建原核表達(dá)質(zhì)粒PT-BAD/fimA，獲得在大腸桿菌中的表達(dá)，基體輔助激光解吸電離-飛行時(shí)間質(zhì)譜(MALDI-TOF-MS)鑒定重組蛋白。以不同濃度咪唑緩沖液(250uM、200 uM、150 uM、100 uM、50 uM)洗脫結(jié)合在His-tag 純化柱的目的蛋白，選擇最佳洗脫濃度。
　　 結(jié)果：克隆基因測(cè)序結(jié)果與GenBank 數(shù)據(jù)庫(kù)中的序列呈現(xiàn)99.9

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