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1、目的:研究抑制小窩蛋白-1磷酸化對(duì)機(jī)械通氣所致肺損傷的效應(yīng)。
方法:50只健康雄性SD大鼠隨機(jī)分為A、B1、B2、C1、C25組(每組10只)。A組為正常對(duì)照組:只行氣管切開;B1組為1h大潮氣量機(jī)械通氣組;B2組為2h大潮氣量機(jī)械通氣組;C1組為1h大潮氣量機(jī)械通氣+酪氨酸蛋白激酶抑制劑PP2(5mg/kg)組;C2組為2h大潮氣量機(jī)械通氣+酪氨酸蛋白激酶抑制劑PP2(5mg/kg)組。C1和C2組在機(jī)械通氣前1h前腹腔注射
2、抑制劑。A組大鼠在測(cè)定完基礎(chǔ)MAP和動(dòng)脈血?dú)夂蠓叛幩?,并采集?biāo)本。B1組和C1組在機(jī)械通氣0h和1h后測(cè)定動(dòng)脈血?dú)?。在通?h后放血處死,采集標(biāo)本。B2組和C2組分別在通氣0h、1h和2h時(shí)測(cè)定動(dòng)脈血?dú)?,在通?h后放血處死,采集標(biāo)本。各組大鼠均連續(xù)監(jiān)測(cè)平均動(dòng)脈壓(mean arterialpressure MAP)。在光鏡下觀察各組肺組織病理改變,并且作彌漫性肺泡損傷系統(tǒng)(diffuse alveolar damage DAD)評(píng)分
3、,采用比色法測(cè)定髓過氧化物酶(myeloperoxidase MPO)活性,計(jì)算肺濕/干比(W/D),蛋白印跡檢測(cè)磷酸化小窩蛋白-1[P-Cav-1(Y14)]和小窩蛋白-1(Cav-1)表達(dá)情況,免疫組織化學(xué)染色法檢測(cè)肺組織中內(nèi)皮型一氧化氮合酶(eNOS)和白介素-1受體相關(guān)激酶4(IRAK4)表達(dá)情況,酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)檢測(cè)各組大鼠肺泡灌洗液中的TNF-a的水平,伊文思藍(lán)(Evans blue)法檢測(cè)肺血管通透性。
4、> 結(jié)果:A組比較,B1、B2、C1、C2組病理損傷評(píng)分、肺濕/干比重、Cav-1、eNOS、IRAK4表達(dá)量、TNF-a的水平、伊文思藍(lán)滲出量、MPO活性、MAP及血?dú)夥治霾町惥薪y(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05);和A組比較,B1、 B2、C1組P-Cav-1表達(dá)升高(均P<0.05),而C2組P-Cav-1(Y14)表達(dá)量差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);C1組與B1組比較,C2組與B2組比較,病理損傷評(píng)分、肺濕/干比重,P-Cav-
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