免疫營養(yǎng)素DHA協(xié)同5-FU抑制胃癌的基礎研究與腸內營養(yǎng)治療改善胃癌術后預后的臨床研究.pdf

1、第一部分
　　 二十二碳六烯酸(DHA)，研究證實不僅具有供能改善營養(yǎng)狀況的特性而且在體外實驗中證實具有抑制多種實體腫瘤細胞增殖生長的抗腫瘤特性，但是仍有部分實驗結果與此不同。另外在我們前期研究中發(fā)現(xiàn)ω-3Pufas的二十碳五烯酸(EPA)能增效表阿霉素對胃癌細胞的抑制作用，但是機制尚不清楚，故本研究擬在此基礎上從細胞培養(yǎng)和動物實驗兩個水平進一步探討DHA聯(lián)合氟尿嘧啶(FU)對胃癌的作用和相關機制。
　　 [研究目的]研

2、究DHA與FU在體外和體內兩個水平對胃癌細胞和人胃癌裸鼠移植瘤的影響，二者的聯(lián)合抗癌效率，探討DHA和FU聯(lián)合抗癌的相關機制。為胃癌綜合治療提供新思路。
　　 [研究方法]
　　 1.體外實驗:首先采用MTT法檢測兩種抗癌介質對胃癌細胞SGC7901和MGC803的抑制作用，DHA對正常細胞株人胚肺成纖維細胞的影響，根據(jù)Chou-Talaly中效原理計算兩抗癌介質的中效濃度以及判定聯(lián)合應用時的相互作用關系；其次使用DHA

3、和FU兩種介質單用或聯(lián)用干預胃癌細胞24h后依次進行:①Transwell小室檢測胃癌細胞體外侵襲能力的改變，②流式細胞儀檢測細胞周期變化，③硫代巴比妥酸法(TBARS)檢測細胞膜發(fā)生脂質過氧化反應(LPO)生成終產物丙二醛(MDA)的水平，④熒光探針DCF檢測細胞內活性氧族(Ros)水平，⑤AnnexinV-FITC/PI雙染法檢測細胞凋亡率，⑥WesternBlot法檢測藥物作用相應靶蛋白表達變化情況。
　　 2.體內實驗:

4、富含DHA的魚油脂肪乳劑Omegaven和FU單用和聯(lián)合干預人胃癌裸鼠移植瘤模型21天，觀察裸鼠一般生長狀況、體重變化、腫瘤體積和重量變化、移植瘤病理改變以及WesternBlot檢測移植瘤凋亡蛋白表達變化。
　　 [結果]
　　 體外實驗:
　　 1.低濃度DHA對HPF增殖無抑制作用，2.低濃度DHA對胃癌細胞SGC7901和MGC803增殖有抑制作用，隨作用劑量增加、作用時間延長而增強，呈劑量-時間依賴效應

5、，3.低濃度DHA聯(lián)合FU有很強的增殖抑制作用，兩介質聯(lián)合應用時的中效濃度均比單用時顯著降低，二者聯(lián)用在抑制作用達30％時合用指數(shù)CI<1，二者增殖抑制作用存在協(xié)同關系，4.DHA和FU合用顯著抑制SGC7901的體外侵襲能力，減少Transwell小室模型中穿膜細胞數(shù)，5.兩者合用共同抑制胃癌細胞生長停滯于G0/G1期，6.DHA能誘發(fā)SGC7901發(fā)生LPO，F(xiàn)U幾乎無此作用，兩者聯(lián)用未見LPO反應產物MDA水平升高，與DHA單用比

6、較，差異無統(tǒng)計學意義，P>0.05，40μg/mlVitC對SGC7901無增殖或抑制作用，預先用VitC干預16h后，DHA誘發(fā)LPO作用被削弱，MTT檢測DHA與FU聯(lián)用時對SGC7901增殖的抑制作用也被廢除，7.本研究所用的兩種濃度的DHA(30、60μg/ml)能誘發(fā)較高水平的細胞內Ros，顯著強于FU(12.5、25μg/ml)，兩者聯(lián)用產生的Ros水平顯著高于二者單用，P<0.05，8.FU、DHA單用誘發(fā)SGC7901凋

7、亡作用不顯著，兩者合用時，凋亡率顯著升高，P<0.05，9.WesternBlot結果顯示:FU上調bcl-2，對caspase-3表達無促進作用，DHA逆轉FU的作用，并促進caspase-3表達，下調Cox2表達，兩者合用時bcl-2、cox2、MnSOD表達下調，剪切型caspase-3上調；
　　 體內實驗:
　　 1.與control組比較，Omegaven未見明顯促進腫瘤生長，F(xiàn)U聯(lián)用Omegaven能顯著抑

8、制移植瘤生長，2.應用FU的小鼠體重丟失嚴重，加用Omegaven后有助于保護小鼠體重丟失，3.WesternBlot結果顯示:Omegaven和FU聯(lián)用較單用顯著降低bcl2表達。
　　 [結論]
　　 1.體外環(huán)境中，DHA不會刺激胃癌細胞的增長，在適宜濃度下能抑制胃癌腫瘤細胞而對正常細胞無抑制作用，從濃度標準分析，無法單獨等同于化療藥物:
　　 2.DHA與FU聯(lián)用在體外環(huán)境中可以協(xié)同抗癌，增效FU對胃癌細

9、胞的毒細胞作用，與FU單獨作用相比，添加低濃度DHA可以減少FU的用量而不削弱抑制作用的效果:
　　 3.DHA聯(lián)合FU協(xié)同抗癌的作用可能與兩者協(xié)同阻滯細胞周期于G0/G1期，DHA誘發(fā)脂質過氧化反應，進而二者協(xié)同形成大量活性氧族，引起細胞內環(huán)境氧化應激水平升高，細胞凋亡增多，分子層面的凋亡調控機制可能與DHA抑制或下調了FU引起的bcl-2表達增加，并促進caspase-3表達增加有關，同時可能還包括DHA下調Cox2蛋白表達

10、水平，與FU共同下調MnSOD表達；
　　 4.富含ω-3Pufas(DHA、EPA)的Omegaven在裸鼠移植瘤模型中運用不誘導移植瘤的增長，聯(lián)合FU時能顯著抑制腫瘤的生長，而且與單用FU比較，Omegaven能防止小鼠體重的嚴重丟失，作用機制可能與兩者聯(lián)用誘發(fā)調亡相關。
　　 第二部分
　　 根治性手術是胃癌病人首選治療手段，但是并非所有接受根治性手術的病人能夠術后長期生存，故影響病人術后生存的因素眾多，北

11、京協(xié)和醫(yī)院每年診治胃癌病例較多，分析總結這些胃癌術后病人的生存情況以及腸內營養(yǎng)干預對術后近期的獲益可促進今后治療水平的提高。
　　 [目的]
　　 1.分析在我院行胃癌手術的病人術后1、3、5年生存率以及影響術后長期生存的獨立危險因素。
　　 2.分析術后3-6月內通過空腸造口管積極給予腸內營養(yǎng)支持的胃癌術后病人短期預后和收益。
　　 [方法]
　　 1.回顧性分析2002年12月至2003年12

12、月在我院行胃癌手術的120例病人資料，收集病例的一般情況、臨床病例資料、隨訪資料，EpiData3.0建立數(shù)據(jù)庫，數(shù)據(jù)采集完成導入SpSS進行統(tǒng)計分析。
　　 2.進行營養(yǎng)干預分析時入選2002年12月至2007年12月間29例胃癌手術中同期行空腸造口管病例為帶管組，從進行生存分析的120例病人中選擇32例未帶空腸造口管病人為對照組，比較兩組病例在體重、BMI、TLC、Hb、AIb、化療耐受、NRS2002評分、Karporfs

13、ky(KPS)評分等方面的差異。
　　 [結果]
　　 1.生存分析結果①全組120例胃癌手術病人Kaplan-Meier分析l、3、5年生存率89.7％、45.1％、28.9％。胃竇癌1、3、5年生存率分別為94.0％、65.9％、42.0％，胃底賁門部癌1、3、5年生存率分別為79.4％、32.4％、16.3％，胃體、全胃癌1、3、5年生存率為81.6％、28.2％、12.1％，P=0.000。臨床分期I+II、II

14、I、IV各期的1、3、5年生存率和中位生存時間分別為94.1％、82.0％、57.4％、68.0±0.000m(I+II期)，89.1％、45.5％、21.6％、33±6.092m(III期)，81.4％、12.6％、8.4％、21±1.906m(IV期)，P=0.000。
　　 ②LogRank檢驗篩選出:年齡(P=0.043)、手術方式(P=0.000)、根治度(P=0.000)、手術失血(P=0.025)、輸血(P=0.0

15、00)、貧血(P=0.001)、腫瘤部位、大小、分化、LN轉移、腫瘤T和TNM分期(P=0.000)是影響病人長期生存的獨立因素③Logistic回歸和Cox回歸分析顯示:腫瘤大小(Exp(β)/RR=1.598)、LN轉移(Exp(β)/RR=1.599)、臨床腫瘤分期(Exp(β)/RR=1.572)等腫瘤病理特征密切與胃癌術后長期生存相關，而上述特征變量的等級越高，預后越差，死亡風險比例增加。
　　 2.腸內營養(yǎng)干預分析結

16、果①與圍手術期比較，術后3-6個月內帶管組29例病人與未帶管組32例病人體重均有丟失。帶管組病例體重丟失7.09±3.3Kg，未帶管組平均丟失9.87±3.1Kg，帶管組比未帶管組體重丟失少，差異有統(tǒng)計學意義，P=0.020；帶管組病例術前BMI與非帶管組無差異，兩組病例術后3-6個月時BMI均降低，P=0.000，帶管組BMI減少2.4±1.0kg/m2顯著小于未帶管組3.2±0.9kg/m2，P=0.041，同樣，兩組病例BMI術前

17、術后變化差異有統(tǒng)計學意義，P=0.041，②與術前比較，帶管組病例手術后3-6月內NRS2002評分≥3者減少，未帶管組增加，兩組間差異比較有顯著性，P=0.000，③與術前比較，帶管組病例手術后KPS增加的病例的比例超過未帶管組，差異有顯著性，P=0.003，④兩組病人在TLC、Hb、Alb、preAlb、化療副反應方面未見明顯差異。
　　 [結論]
　　 1.本研究顯示北京協(xié)和醫(yī)院2003年施行胃癌手術的病例術后1、

18、3、5年總體生存率89.7％、45.1％、28.9％，其中胃竇癌預后較好，胃底賁門部癌預后最差2.年齡、手術方式、根治度、手術失血、輸血、貧血、腫瘤部位、大小、分化、LN轉移、浸潤深度、腫瘤分期均是影響病人長期生存的獨立因素，Logistic和cox危險因素回歸分析顯示腫瘤大小(RR=1.598)、LN轉移(RR=1.599)、腫瘤分期(RR=1.487)等腫瘤病理特征為影響胃癌術后長期生存的獨立因素；；
　　 3.圍手術期以及