核酸酶Onconase抗腫瘤研究.pdf

1、腫瘤一直是危害人類健康的一大疾病,目前我們還沒有非常有效的治療腫瘤的方法,一些用于治療腫瘤的藥物由于免疫源性強(qiáng),毒副作用大而效果不理想.尋找高效的抗腫瘤藥物一直是抗腫瘤研究的熱點(diǎn).廣泛存在于機(jī)體內(nèi)的核酸酶是一類序列保守,結(jié)構(gòu)穩(wěn)定,以RNA為底物的蛋白.它們具有的抗腫瘤特性引起了大家的興趣,特別是由于它們和機(jī)體內(nèi)源性蛋白相似、分子量小,作為抗腫瘤藥物,它們具有免疫源性弱、毒副作用小等優(yōu)點(diǎn).九十年代在兩棲類蛙卵(Rana pipiens)內(nèi)

2、發(fā)現(xiàn)的核酸酶-Onconase的抗腫瘤效果目前在核酸酶家族中是最好的,在體內(nèi)外試驗(yàn)中,Onconase對(duì)一系列腫瘤都有明顯的治療效果,作為抗腫瘤藥物有很大的潛力.我們的研究主要是提高Onconase的抗腫瘤特異性,希望構(gòu)造出特異性抗腫瘤藥物.我們根據(jù)大腸桿菌密碼子偏好性,合成編碼Oncoanse的基因,將Onconase基因通過MscI和SalI酶切位點(diǎn)克隆在pET22b(+)表達(dá)載體上,在大腸桿菌BL21(DE3)中以包涵體的形式大量

3、表達(dá)重組Onconase.通過包涵體復(fù)性,純化過程最終獲得與天然蛋白有一致酶活和腫瘤細(xì)胞毒性的重組Onconase.在體外細(xì)胞水平上研究重組Onconase對(duì)淋巴瘤細(xì)胞Hut-78、K562的毒性,并在此基礎(chǔ)上,用化學(xué)偶聯(lián)試劑SPDP將重組Onconase和轉(zhuǎn)鐵蛋白用二硫鍵偶聯(lián),研究偶聯(lián)后蛋白對(duì)高表達(dá)轉(zhuǎn)鐵蛋白受體的K562細(xì)胞的特異性.我們的研究證明了構(gòu)建基于Onconase的特異性抗腫瘤蛋白的可行性,為以后開發(fā)Onconase的特異性