基于核酸酶信號(hào)放大單堿基多態(tài)性分析.pdf

1、核酸探針設(shè)計(jì)簡(jiǎn)單、穩(wěn)定性好,具有高選擇性、高特異性及易合成修飾和信號(hào)機(jī)制轉(zhuǎn)換靈活等優(yōu)勢(shì),已被廣泛應(yīng)用于分析化學(xué)、生物醫(yī)學(xué)、疾病診斷治療與新藥研發(fā)等方面。信號(hào)放大技術(shù),尤其是利用工具酶結(jié)合其他分析檢測(cè)手段的信號(hào)放大技術(shù),由于其方法簡(jiǎn)單,靈敏度和特異性高,反應(yīng)時(shí)間相對(duì)較短,近年來在核酸、蛋白質(zhì)、重金屬等物質(zhì)痕量分析方面的得到了迅速發(fā)展?；谝陨峡紤],本文著眼于核酸探針靈活的信號(hào)轉(zhuǎn)換機(jī)制和核酸酶的特異性,將核酸探針與核酸酶相結(jié)合,實(shí)現(xiàn)高靈敏、

2、特異性核酸檢測(cè)及單堿基多態(tài)性分析,包括如下兩個(gè)方面的工作:
　　 (1)基于RNase H的特異性作用和二氫卟吩Ce6的光敏特性,發(fā)展了一種結(jié)合酶切和單線態(tài)氧雙重信號(hào)放大單堿基多態(tài)性分析。當(dāng)有完全互補(bǔ)DNA存在時(shí),基于RNase H的特異性作用實(shí)現(xiàn)循環(huán)放大,多次循環(huán)后,探針以單鏈形式存在并被吸附到單壁碳納米管表面,二氫卟吩Ce6的光敏活性猝滅。當(dāng)靶DNA和探針在RNA堿基處存在錯(cuò)配時(shí),探針不能吸附到單壁碳納米管表面,二氫卟吩Ce

3、6促使單線態(tài)氧的持續(xù)產(chǎn)生。通過檢測(cè)兩種情況下溶液中單線態(tài)氧捕獲劑SOSG的熒光差異實(shí)現(xiàn)了高靈敏、特異性單堿基多態(tài)性分析。該方法設(shè)計(jì)簡(jiǎn)單,靈敏度高,有望發(fā)展成為一種通用的單堿基多態(tài)性分析方法。
　　 (2)結(jié)合RNase H的特異性作用和G-四鏈體的過氧化物酶活性,發(fā)展了一種免標(biāo)記放大單堿基多態(tài)性分析。當(dāng)有完全互補(bǔ)序列存在時(shí),與核酸探針形成雙鏈結(jié)構(gòu),由于RNA堿基被特異性識(shí)別和切割,釋放出目標(biāo)序列,與下一個(gè)核酸探針分子結(jié)合。經(jīng)過多