卡維地洛對(duì)充血性心力衰竭患者外周血單個(gè)核細(xì)胞細(xì)胞因子分泌及NF-κB活化的影響.pdf

1、目的：充血性心力衰竭(congestiveheartfailure，CHF)是一種常見(jiàn)而嚴(yán)重的臨床綜合征，其發(fā)病機(jī)制一直是心血管領(lǐng)域的研究重點(diǎn)。近年來(lái)，大量研究發(fā)現(xiàn)細(xì)胞因子的激活及細(xì)胞因子介導(dǎo)的免疫應(yīng)答在心力衰竭的發(fā)展中起著重要的作用。CHF時(shí)外周血及心肌局部有大量的炎癥介質(zhì)分泌，參與心肌細(xì)胞凋亡、心肌收縮力下降等而影響心衰的進(jìn)展。核因子-κB(nuclearfactor-κB，NF-κB)是目前研究較多的一種具有基因轉(zhuǎn)錄多向調(diào)控作用的

2、轉(zhuǎn)錄因子，具有啟動(dòng)和調(diào)控基因轉(zhuǎn)錄的作用。研究發(fā)現(xiàn)NF-κB參與心室重塑、心肌細(xì)胞炎癥等。多種炎癥因子受到NF-κB調(diào)控，包括：腫瘤壞死因子(tumornecrosisfactora，TNF-a)、白介素-1β(interleukin-1β，IL-1β)、白介素-6(interleukin-6，IL-6)等。而卡維地洛[1](carvedilol,CAR)是一種新型的第三代β-受體阻滯劑，可非選擇性阻滯β1、β2受體和選擇性阻滯a1-受體

3、，具有強(qiáng)大的抗氧化活性，可拮抗神經(jīng)內(nèi)分泌的激活、抗心室重塑、抑制炎性反應(yīng)等作用。臨床研究證實(shí)，卡維地洛可明顯改善充血性心力衰竭患者的臨床癥狀，大規(guī)模臨床試驗(yàn)證實(shí)了卡維地洛能明顯降低心衰患者的死亡率。本實(shí)驗(yàn)觀察不同劑量卡維地洛對(duì)CHF患者及健康人培養(yǎng)的外周血單個(gè)核細(xì)胞(peripheralbloodmononuclearcell，PBMC)在脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激下細(xì)胞因子(TNF-a、IL-1β、IL

4、-6)分泌及單個(gè)核細(xì)胞NF-κB活性的變化，探討卡維地洛改善癥狀和降低心衰死亡率的可能機(jī)制。 方法：心衰組15例，來(lái)自瀘州醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院心內(nèi)科2005年10月至2005年12月底的住院心力衰竭患者，心功能NYHA分級(jí)Ⅲ-Ⅳ級(jí)，Ⅲ級(jí)心功8例，Ⅳ級(jí)心功7例，其中擴(kuò)心病11例，冠心病2例，高心病2例，經(jīng)超聲診斷LVEF＜45％。健康組15例，來(lái)自瀘州醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院門診健康體檢者。兩組近1周內(nèi)均未應(yīng)用β受體阻滯劑，排除吸煙、糖尿病，無(wú)感

5、染、惡性腫瘤、無(wú)風(fēng)濕活動(dòng)及自身免疫性疾病等。心衰組在住院次日清晨(健康者為體檢當(dāng)日)抽取空腹12小時(shí)肘靜脈血5ml。應(yīng)用淋巴細(xì)胞分離液(Ficollhypaqued=1.077)分離單個(gè)核細(xì)胞，用含10％胎牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)基(含2mmol谷氨酰氨，100IU/ml青霉素，100ug/ml鏈霉素)懸浮細(xì)胞，加入24孔培養(yǎng)板。每組設(shè)4個(gè)孔，每孔分別加入不同濃度卡維地洛(0、2.5、5、10umol/L)進(jìn)行干預(yù)，置入37℃，5

6、％CO2飽和濕度的孵育箱中，2小時(shí)后每孔均加入LPS(1ug/ml)(細(xì)胞終濃度為1×106個(gè)/L)。刺激24小時(shí)后應(yīng)用放射免疫法測(cè)定培養(yǎng)上清液中IL-1β、IL-6和TNF-a水平，并將單個(gè)核細(xì)胞離心涂片并固定后采用生物素-鏈霉親和素免疫組織化學(xué)染色法，進(jìn)行NF-κB染色，測(cè)定為NF-κB+細(xì)胞率。所有數(shù)據(jù)(NF-κB及IL-6數(shù)據(jù)為原數(shù)據(jù)的對(duì)數(shù)值，IL-1β、TNF-a數(shù)據(jù)為原數(shù)據(jù)10倍后的對(duì)數(shù)值)以均數(shù)士標(biāo)準(zhǔn)差((X)±S)表示，

7、計(jì)量資料用SAS8.0統(tǒng)計(jì)軟件分別作析因方差分析，顯著性水平為P＜0.05。 結(jié)果：1.卡維地洛對(duì)健康組PBMC在LPS刺激下細(xì)胞因子及NF-κB的影響：①TNF-a：卡維地洛濃度為5umol/L(2.68±0.56ng/L)及10umol/L(2.34±0.67ng/L)與0umol/L(3.12±0.58ng/L)組相比，水平有顯著差異性(P＜0.05)，2.5umol/L(2.94±0.54ng/L)與10umol/L、5

8、umol/L與10umol/L之間差異也有顯著性(P＜0.05)，0與2.5umol/L、5umol/L與10umol/L之間比較無(wú)顯著差異性(P＞0.05)。②IL-1β：0umol/L(3.53±0.27ng/L)與5umol/L(3.00±0.48ng/L)、0umol/L與10umol/L(2.79±0.59ng/L)、2.5umol/L(3.35±0.39ng/L)與5umol/L、2.5umol/L與10umol/L之間差異

9、有顯著性(P＜0.05)，0umol/L與2.5umol/L、5umol/L與10umol/L之間差異不顯著(P＞0.05)。③IL-6：5umol/L(6.27±0.33pg/L)及10umol/L(6.08±0.41pg/L)濃度組與單純脂多糖刺激組(6.53±0.28pg/L)相比有顯著差異(P=0.05和P＜0.05)，2.5umol/L(6.38±0.34pg/L)與10umol/L組比較也有顯著差異(P＜0.05)，0umo

10、l/L與2.5umol/L、2.5umol/L與5umol/L、5umol/L與10umol/L組比較無(wú)顯著差異(P＞0.05)。④NF-κB：在健康體檢組中，不同濃度卡維地洛組0(2.95±0.21)與2.5umol/L(2.68±0.34)、0與5umol/L(2.37±0.36)、0與10umol/L(2.15±0.34)、2.5umol/L與5umol/L、2.5umol/L與10umol/L、5umol/L與10umol/L比

11、較，均有顯著性差異(所有均為P＜0.05)。 2.卡維地洛對(duì)CHF組PBMC在LPS刺激下細(xì)胞因子及NF-κB的影響：①TNF-a：在心衰組中，CHF患者PBMC分泌細(xì)胞因子水平在卡維地洛濃度為5umol/L及10umol/L(3.27±0.59ng/L、2.96±0.68ng/L)與0umol/L(4.11±0.60ng/L)和2.5umol/L(3.71±0.55ng/L)比較有顯著差異性(P＜0.05)，其余各濃度之間(0

12、umol/L與2.5umol/L、5umol/L與10umol/L)比較差異不明顯(P＞0.05)。②IL-1β：在心衰組中，CHF患者PBMC分泌細(xì)胞因子IL-1β水平在卡維地洛濃度為10umol/L(3.53±0.47ng/L)時(shí)，與0umol/L(3.97±0.44ng/L)相比水平有顯著差異(P＜0.05)，5umol/L(3.67±0.46ng/L)與0umol/L組相比，差異雖不顯著，但有顯著差異傾向(P為0.06)。2.5

13、umol/L(3.79±0.46ng/L)與0umol/L組相比，差異不顯著(P＞0.05)。相鄰兩濃度(0umol/L與2.5umol/L、2.5umol/L與5umol/L、5umol/L與10umol/L)之間比較差異不明顯(P＞0.05)。③IL-6：在心衰組中，CHF患者PBMC分泌細(xì)胞因子IL-6水平在卡維地洛濃度為10umol/L(6.59±0.38pg/L)時(shí)，與0umol/L(6.92±0.41pg/L)相比水平有顯著

14、差異(P＜0.05)。2.5umol/L(6.82±0.38pg/L)與10umol/L組相比有顯著差異傾向(P為0.09)，其余兩濃度0umol/L與2.5umol/L、0與5umol/L(6.75±0.36pg/L)、2.5umol/L與5umol/L、5umol/L與10umol/L之間比較差異不明顯(P＞0.05)。④NF-κB：在心衰組中，各卡維地洛濃度組0umol/L(3.72±0.16)與5umol/L(3.36±0.16

15、)、0umol/L與10umol/L(3.11±0.19)、2.5umol/L與5umol/L、2.5umol/L與10umol/L、5umol/L與10umol/L之間比較均有顯著差異性(所有均為P＜0.05)，僅2.5umol/L(3.59±0.15)與0umol/L(3.72±0.16)組比較差異不顯著(P＞0.05)3、相關(guān)分析顯示：相關(guān)分析顯示，外周血單個(gè)核細(xì)胞NF-κB陽(yáng)性細(xì)胞率與培養(yǎng)上清液中細(xì)胞因子TNF-a、IL-1β、