急性化膿性梗阻性膽管炎時肝組織中清道夫受體-A的表達及意義.pdf

1、清道夫受體-A (Scavenger receptor A，SR-A)是一種跨膜糖蛋白受體，分為Ⅰ型、Ⅱ型、Ⅲ型和膠原樣巨噬細胞受體(MARCO)等4型，主要分布在各類組織器官的巨噬細胞上，尤其是肝臟枯否氏細胞(Kupffer cells，KCs)和脾、淋巴結(jié)的巨噬細胞上，是巨噬細胞表面重要的防御性受體，能與細菌脂多糖(LPS，內(nèi)毒素的重要成分)結(jié)合，在介導(dǎo)巨噬細胞對細菌內(nèi)毒素清除和滅活等機體防御反應(yīng)中起重要作用。 急性梗阻性化

2、膿性膽管炎(Acute obstructive suppurative cholangitis，AOSC)是肝膽外科常見疾病，易導(dǎo)致膿毒癥、感染性休克和多器官功能衰竭綜合征(Multiple organ dysfunction syndrome，MODS)。對AOSC的治療以手術(shù)盡早解除梗阻，減壓引流膽道為主。其術(shù)后仍有較高的死亡率，與膿毒癥繼續(xù)發(fā)展以及并發(fā)MODS有關(guān)。因此術(shù)后正確、有效的治療仍十分重要。 KCs是位于肝血竇內(nèi)

3、的固定型巨噬細胞，數(shù)量龐大，其表面存在多種LPS受體。由于KCs與從腸道進入門靜脈血的LPS密切接觸，因此它在機體清除細菌及內(nèi)毒素的防御方面以及通過釋放各種細胞因子等介導(dǎo)MODS，尤其是內(nèi)毒素性肝損傷方面都起重要作用。 內(nèi)毒素血癥時單核巨噬細胞脂多糖受體CD14和SR-A表達的研究目前己成眾多學(xué)者關(guān)注的課題，SR-A在機體防御系統(tǒng)中的作用也逐漸被人們認識。SR-A與LPS的結(jié)合可能是正常情況下單核巨噬細胞清除LPS的一條重要的非

4、炎性途徑。而肝組織內(nèi)KCs表面SR-A表達下調(diào)、CD14表達上調(diào)可能是內(nèi)毒素血癥過程中，KCs由防御性細胞轉(zhuǎn)化為效應(yīng)性細胞的重要機制。 目前肝組織中KCs表面的SR-A在AOSC時表達的變化以及與炎癥介質(zhì)產(chǎn)生、內(nèi)毒素性肝損傷的相互關(guān)系的研究尚未見報道。本課題擬從肝膽外科較為常見的AOSC入手，通過建立大鼠膽管炎動物模型，進一步從組織細胞、分子、基因水平等不同層面揭示AOSC時肝組織中SR-A的表達及其意義。 目的：觀察A

5、OSC時大鼠肝組織中清道夫受體的表達及其與炎癥介質(zhì)的產(chǎn)生、內(nèi)毒素性肝損傷的關(guān)系。探索除外科手術(shù)外，通過調(diào)控KCs的功能特別是調(diào)控SR-A的表達來治療膿毒癥和MODS的理論依據(jù)，為 AOSC的進一步治療提供新的思路。 方法：將Wistar大鼠隨機分三組，第一組為急性膽道感染(AOC)組：通過結(jié)扎大鼠膽總管、于膽總管內(nèi)注入大腸桿菌O<,111>B4建立急性膽管炎動物模型；第二組為膽總管結(jié)扎(BDL)組：結(jié)扎膽總管并注射等量生理鹽水；

6、第三組為僅行開關(guān)腹手術(shù)的假手術(shù)(SO)組。于術(shù)后0h、3h、6h、12h、24h活殺動物取材。采用鱟試劑基質(zhì)偶氮顯色法測定不同組不同時相點血漿中內(nèi)毒素含量；同時以酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)測定血漿中細胞因子 TNF-α及IL-6的變化；應(yīng)用免疫組織化學(xué)(IHE)、逆轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈反應(yīng)法(RT-PCR)分別檢測不同時相肝組織中SR-A蛋白及mRNA的表達；光鏡觀察肝組織病理變化；統(tǒng)計學(xué)分析：實驗數(shù)據(jù)以平均值±標準差(x±s)表示，SPS

7、S10.5統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計分析，AOC組分別與BDL組、SO組進行比較。組間比較采用t檢驗。 結(jié)果： 1．血漿內(nèi)毒素含量變化：AOC組在術(shù)后3h血漿內(nèi)毒素含量就已明顯升高，并隨處理時間的延長其含量逐漸增加，在24h時(0.784±0.097Eu/ml)仍呈上升趨勢，與BDL、SO組(分別為0.078±0.01 2Eu/ml、0.065±0.004Eu/ml)比較，差異非常顯著(P<0.01)。BDL組在24h時血漿內(nèi)毒素

8、水平輕度升高而SO組各時相點內(nèi)毒素含量無明顯變化。 2．血漿TNF-α和IL-6水平的變化：AOC組血漿TNF-α在術(shù)后3h升高明顯；IL-6則在術(shù)后3 h起開始升高，6h后才顯著增高。兩者均隨處理時間的延長其含量繼續(xù)增加，在24h時分別為579.2±81.1pg/ml、520.4±78.4pg/ml。與BDL、SO組(分別為66.3±8.9pg/ml、47.7±6.8pg/ml和124.7±20.6pg/ml、105.9±14

9、.7pg/ml)比較，差異非常顯著(P<0.01)。BDL組在12h和24h時相點TNF-α輕度升高、24h時相點IL-6輕度升高。SO組各時相點TNF-α和IL-6含量無明顯變化。 3．免疫組化染色顯示：棕黃色的SR-A 免疫組化染色陽性物質(zhì)主要定位于KCs胞膜。AOC組0時相點和BDL、SO組的各個時相點肝組織中SR-A的表達呈彌漫性分布；而AOC組在術(shù)后3h SR-A的表達開始下降，隨著處理時間延長，棕黃色物質(zhì)逐漸減少，在

10、24h(18±2mcp/HP)時非常明顯，與BDL、SO組(131±16mcp/HP、128±19mcp/HP)比較，差異非常顯著(P<0.01)。 4．肝組織中SR-A mRNA的表達：RT-PCR顯示AOC組在術(shù)后3h，SR-A mRNA的表達已開始下降，隨著處理時間延長，SR-AmRNA的表達逐漸下降，在24h時相對表達量(0.138±0.019)與BDL組、SO組(0.611±0.077、0.586±0.076)比較，差

11、異非常顯著(P<0.01)。BDL、SO組無明顯的SR-A mRNA表達的改變。這就從基因水平進一步說明了SR-A mRNA表達變化與免疫組化染色的結(jié)果-蛋白表達的變化的一致性，即隨著血漿內(nèi)毒素水平的升高，SR-A 蛋白和基因的表達均下降。 5．肝組織病理變化：光鏡下AOC組可見隨著處理時間延長而逐漸加重的肝組織損傷，至24h時，肝血竇擴張明顯，大量炎癥細胞浸潤，出現(xiàn)大面積的肝細胞變性壞死；BDL組僅有輕度改變；SO組無變化。