Gleevec對(duì)人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞株SF767、T98MG生長抑制作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、本文分四部分論述了Gleevec對(duì)人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞株SF767、T98MG生長抑制作用的實(shí)驗(yàn)研究。 第一部分Gleevec抑制人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞株SF767、T98MG生長的體外實(shí)驗(yàn)研究。 目的：觀察Gleevec對(duì)體外培養(yǎng)的人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞株SF767、T98MG是否具有抑制生長作用，并試圖探討其內(nèi)在的分子生物學(xué)機(jī)制。 方法：體外培養(yǎng)SF767、T98MG細(xì)胞，用MTT法和集落形成試驗(yàn)檢測(cè)Gleevec的細(xì)胞生長抑制作

2、用；用流式細(xì)胞儀檢測(cè)Gleevec對(duì)細(xì)胞周期分布的影響；將細(xì)胞分成三組：對(duì)照組、gleevec8uM處理12小時(shí)組、gleevec8uM處理24小時(shí)組，用免疫熒光定量RT-PCR技術(shù)檢測(cè)各組的B觚、P21、Rad51mRNA的表達(dá)變化。 結(jié)果：MTT法和集落形成試驗(yàn)均發(fā)現(xiàn)Gleevec能抑制SF767、T98MG細(xì)胞生長，有良好的量效關(guān)系。其IC50值8uM左右；流式細(xì)胞術(shù)顯示細(xì)胞周期阻滯于G1期，未見凋亡：RT．PCR結(jié)果表明

3、Gleevec作用于SF767、T98MG，Rad5lmRNA表達(dá)下調(diào)，P21mRNA表達(dá)上調(diào)。 結(jié)論：Gleevec能抑制SF767、T98MG細(xì)胞的體外生長，細(xì)胞周期阻滯是其細(xì)胞學(xué)機(jī)制，P2l、R甜51mRNA的表達(dá)改變可能參與了其中的分子生物學(xué)機(jī)制。 第二部分Gleevec和順鉑聯(lián)合抑制人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞株SF767、T98MG生長的體外實(shí)驗(yàn)研究。 目的：觀察Gleevec和順鉑(DDP)對(duì)體外培養(yǎng)的人腦膠質(zhì)瘤

4、細(xì)胞株SF767、T98MG是否具有聯(lián)合抑制生長作用，并試圖探討其內(nèi)在的分子生物學(xué)機(jī)制。 方法：體外培養(yǎng)SF767、T98MG細(xì)胞，用MTT法檢測(cè)DDP和Gleevec與DDP聯(lián)用的細(xì)胞生長抑制作用；用流式細(xì)胞儀檢測(cè)Gleevec與DDP聯(lián)用對(duì)細(xì)胞周期分布的影響；將細(xì)胞分成三組：對(duì)照組、Gleevec組和Gleevec+DDP組，用免疫熒光定量RT．PCR技術(shù)檢測(cè)各組的Bax、P21、Rad51mRNA的表達(dá)變化。 結(jié)果

5、：MTT結(jié)果顯示DDP對(duì)SF767和T98MG有抑制作用，T98MG對(duì)DDP的敏感性(IC50略大于12．5ug/m1)低于SF767(IC50=6．25ug/m1)，SF767在聯(lián)合使用gleevec8uM和順鉑6．25ug/m148小時(shí)后出現(xiàn)協(xié)同效應(yīng)；流式細(xì)胞術(shù)顯示細(xì)胞周期阻滯于G1期；RT—PCR結(jié)果表明GkeVec與順鉑聯(lián)用引起P2l、Bax、Rad51mRNA升高，聯(lián)合作用24小時(shí)的Rad51mRNA的表達(dá)在SF767中比T9

6、8MG弱。 結(jié)論：G1eevec和順鉑聯(lián)合抑制SF767有協(xié)同效應(yīng)，細(xì)胞周期阻滯是其細(xì)胞學(xué)機(jī)制，R甜5l、P21和B觚可能在Gleevec與順鉑對(duì)SF767細(xì)胞的協(xié)同抑制效應(yīng)中起一定作用，Rad51介導(dǎo)的DNA修復(fù)減弱可能起主要作用。 第三部分GIeevec和放射聯(lián)合抑制人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞株sF767、T98MG生長的體外實(shí)驗(yàn)研究。 目的：觀察Gleevec聯(lián)合放射對(duì)體外培養(yǎng)的人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞株SF767、T98MG是

7、否具有聯(lián)合抑制生長作用，并試圖探討其內(nèi)在的分子生物學(xué)機(jī)制。 方法：體外培養(yǎng)SF767、T98MG細(xì)胞，集落形成試驗(yàn)檢測(cè)gkevec對(duì)T98MG、SF767細(xì)胞的放射敏感作用，用流式細(xì)胞儀檢測(cè)G1eevec與放療聯(lián)用對(duì)細(xì)胞周期分布的影響；將細(xì)胞分成五組：對(duì)照組、放射10Gy12小時(shí)組、放射10Gy24小時(shí)組、gleevec8uM預(yù)處理12小時(shí)+放射組、gleevec8uM預(yù)處理24小時(shí)+放射組。用免疫熒光定量RT-PCR技術(shù)檢測(cè)各

8、組的B觚、P2l、R甜51m對(duì)RNA的表達(dá)變化。細(xì)胞免疫化學(xué)染色觀察R砌51foci的形成。 結(jié)果：集落形成法實(shí)驗(yàn)結(jié)果繪制的存活曲線及相關(guān)參數(shù)顯示，放射+藥物組各個(gè)參數(shù)都相應(yīng)小于單放組，單放組DO值分別是放射+藥物組的1．28倍(SF767)和1．22倍(T98MG)。放射+藥物組和單放組相比，放射+藥物組和G1eev∞組相比，Gl相細(xì)胞均減少，而G2／M相細(xì)胞明顯增加。G1eevec預(yù)處理后照射T98MG、SF767，兩細(xì)胞株

9、的P2l、BaxmRNA表達(dá)量均有升高，R甜5lmRNA表達(dá)量下降。在SF767細(xì)胞，2Gy照射和Gleevec預(yù)處理后照射2Gy形成的Rad51foci分別為25％和16％。而T98MG細(xì)胞在2Gy照射和Gleevec預(yù)處理后照射2Gy形成的Rad5lfoci分別為21％和15％。 結(jié)論：Gleevec能增強(qiáng)SF767、T98MG的放射敏感性，G2／M相細(xì)胞明顯增加可能是放射增敏的細(xì)胞機(jī)制，Rad5l下調(diào)和P21上調(diào)可能是放射

10、增敏的分子機(jī)制。 第四部分GIeevec抑制裸鼠荷SF767膠質(zhì)瘤生長的體內(nèi)實(shí)驗(yàn)研究。 目的：觀察Gleevec是否能抑制裸鼠荷sF767膠質(zhì)瘤的生長，并探討其內(nèi)在的分子生物學(xué)機(jī)制。方法將SF767細(xì)胞接種于裸鼠皮下建立動(dòng)物模型，分成兩組：治療組腹腔注射aeevec，對(duì)照組注射PBS液，測(cè)量腫瘤大小變化；移植瘤做成石蠟切片，用免疫組化檢測(cè)兩組腫瘤中PDGFRa、β的表達(dá)，用TUNEL法檢測(cè)腫瘤標(biāo)本的凋亡情況。 結(jié)

11、果：治療組腫瘤生長速度明顯緩于對(duì)照組；至第30天兩組裸鼠荷SF767膠質(zhì)瘤體積分別為治療組033±O．14cm。，對(duì)照組0．77±0．40cm3；重量分別為治療組O．40±O．20g，對(duì)照組O．81±O．42g，兩組間體積和重量均有明顯差異；治療組PDGFRα的強(qiáng)陽性表達(dá)率低于對(duì)照組，兩組間PDGFRB的表達(dá)無明顯差異；TUNEL染色未見凋亡。 結(jié)論：Gleevec能抑制裸鼠荷SF767膠質(zhì)瘤的生長，主要機(jī)制為抑制PDGFRa，