新型植物調(diào)節(jié)物質(zhì)冠菌素耐高溫生產(chǎn)菌株的選育及生產(chǎn)工藝.pdf

1、冠菌素具有茉莉酸(JA)的環(huán)戊烷類似結(jié)構(gòu)和功能，有著多種生理功能，是一種環(huán)境友好型的新型植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)。本研究利用Tn5轉(zhuǎn)座子對(duì)冠菌素產(chǎn)生菌株丁香假單胞菌大豆致病變種(P.syringae.pv.glycinea)PG4180進(jìn)行誘變，選育耐高溫的冠菌素生產(chǎn)菌株，同時(shí)對(duì)其發(fā)酵條件和提取工藝進(jìn)行研究和優(yōu)化，為利用微生物工業(yè)化發(fā)酵生產(chǎn)冠菌素奠定基礎(chǔ)，同時(shí)為綠色食品和有機(jī)農(nóng)產(chǎn)品的生產(chǎn)提供保障。 為獲得耐高溫的冠菌素生產(chǎn)菌株，采用雙親

2、接合的方法將帶有Tn5轉(zhuǎn)座子的質(zhì)粒pRL1063a導(dǎo)入到PG4180中，進(jìn)行轉(zhuǎn)座子插入誘變，共獲得874個(gè)具有卡那霉素和鏈霉素的突變體。通過(guò)測(cè)定突變體的冠菌素產(chǎn)量，篩選到2個(gè)在高溫條件下產(chǎn)冠菌素的突變株MFB132和MFB141，其中突變株MFB141在28℃下的產(chǎn)量高達(dá)37.7 mg/L。PCR擴(kuò)增結(jié)果表明耐高溫突變株都是Tn5插入的。傳代實(shí)驗(yàn)表明菌株MFB141遺傳穩(wěn)定性良好。 為建立發(fā)酵最佳工藝流程，研究了不同的碳源、氮源

3、、初始pH、裝液量、接種量、發(fā)酵時(shí)間等不同發(fā)酵條件下的MFB141菌株冠菌素產(chǎn)量，并對(duì)發(fā)酵條件進(jìn)行了優(yōu)化。結(jié)果表明，最佳培養(yǎng)條件為：2％葡萄糖為碳源，0.1％氯化銨為氮源，培養(yǎng)基初始pH為6.8，裝液量為50mL，接種量為2％，發(fā)酵108h時(shí)MFB141菌株的產(chǎn)量達(dá)到37.7 mg/L. 為建立從發(fā)酵液中大孔吸附樹脂分離冠菌素的提取工藝，研究不同大孔吸附樹脂及冠菌素的提取過(guò)程，并對(duì)相關(guān)參數(shù)進(jìn)行了優(yōu)化，結(jié)果表明：樹脂HPD300為