缺氧狀態(tài)下ERK1-2的激活與肝癌細(xì)胞Bel-7402細(xì)胞周期的關(guān)系.pdf

1、目的：慢性缺氧是多數(shù)實(shí)體性腫瘤細(xì)胞的微環(huán)境改變特征之一，它可促使細(xì)胞的基因及蛋白表達(dá)發(fā)生改變，增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞的增殖、黏附、侵襲能力及對(duì)化療藥物耐藥性。ERK1/2是細(xì)胞在缺氧條件下激活的重要激酶之一，參與調(diào)節(jié)新生血管形成、細(xì)胞的增殖侵襲功能。本實(shí)驗(yàn)主要了解缺氧/復(fù)氧對(duì)肝癌細(xì)胞株Bel-7402的增殖侵襲功能、細(xì)胞周期及對(duì)化療藥物耐藥性的影響，進(jìn)一步探討ERK1/2在缺氧條件下影響肝癌細(xì)胞功能的作用。
　　 方法：免疫印跡檢測(cè)缺氧/

2、復(fù)氧及加入抑制劑U0126對(duì)ERK1/2活化程度的影響。MTT法檢測(cè)缺氧/復(fù)氧細(xì)胞增殖活力的改變以及5-氟尿嘧啶在缺氧/復(fù)氧條件下對(duì)細(xì)胞的抑制作用。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)缺氧/復(fù)氧條件下細(xì)胞周期及凋亡細(xì)胞比例。
　　 結(jié)果：①缺氧24小時(shí)后細(xì)胞增殖率為53.0％，48小時(shí)后為43.6％，72小時(shí)后為40.4％，缺氧24小時(shí)后復(fù)氧24小時(shí)，細(xì)胞增殖率上升為83.9％，復(fù)氧48小時(shí)后為106.9％，缺氧抑制細(xì)胞的增殖能力，復(fù)氧后增殖能力較前

3、有所增強(qiáng)。②缺氧誘導(dǎo)細(xì)胞停留于G1期，隨著缺氧時(shí)間延長(zhǎng)，G1期細(xì)胞比例逐漸增加(69.4％ vs79.3％ vs82.3％)，而S期細(xì)胞比例逐漸減少(23.8％ vs11.9％ vs9.4％)；③ERK1/2在缺氧1小時(shí)后、低于7％O2濃度及含有胎牛血清條件下被激活，給予不同濃度MEK抑制劑U0126后，ERK1/2的活性受到抑制，同時(shí)發(fā)現(xiàn)G1期細(xì)胞比例減少且與ERK1/2的抑制程度成正比；④缺氧明顯增強(qiáng)細(xì)胞對(duì)氟尿嘧啶的耐藥性，常氧條件