白藜蘆醇對(duì)人肝癌細(xì)胞株Bel-7402作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:研究白藜蘆醇(resverartol,Res)對(duì)人肝癌細(xì)胞株Bel-7402增殖、凋亡及其沉默信息調(diào)節(jié)因子1(silent information regulator1,SIRT1)表達(dá)的影響。探討Res在人類肝癌防治中的作用及其機(jī)制。
　　 方法:四甲基偶氮唑藍(lán)(Methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法檢測(cè)不同濃度(0,12.5,25,50,100,200μM)Res和不同作用時(shí)間(24,48

2、,72h)處理人肝痛細(xì)胞株Bel-7402的細(xì)胞抑制率；倒置顯微鏡和熒光顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變；流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞的凋亡率和細(xì)胞周期分布；RT-PCR法檢測(cè)SIRT1 mRNA的表達(dá)；westernblotting法檢測(cè)SIRT1蛋白的表達(dá)。結(jié)果:Res在12.5～200μM濃度,作用時(shí)間24～72h范圍內(nèi),以濃度和時(shí)間依賴方式抑制Bel-7402細(xì)胞增殖(P<0.05)；72小時(shí)半數(shù)抑制濃度為62.84pM；200μM Res抑制率

3、達(dá)77.62±1.51％(P<0.05)。倒置顯微鏡和熒光顯微鏡下分別觀察到典型的細(xì)胞增殖抑制和凋亡的形態(tài)學(xué)改變。經(jīng)0,12.5,25,50,100,200μM Res處理24 h后,流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示,凋亡細(xì)胞的細(xì)胞周期主要發(fā)生S期阻滯；細(xì)胞凋亡率分別為2.56％、16.8％、20.4％、35.8％、38.0％、42.3％(P<0.01)。RT-PCR和western blotting結(jié)果顯示,經(jīng)相同處理(0～200μM Res處理2

4、4 h)后,Bel-7402細(xì)胞SIRT1 mRNA和蛋白表達(dá)均明顯增加(P<0.01),在Res濃度為25μM時(shí)達(dá)到峰值,然后逐漸下降。
　　 結(jié)論:Res通過(guò)增加SIRT1表達(dá)以濃度依賴性和時(shí)間依賴性方式抑制人肝癌細(xì)胞株Bel-7402增殖,誘導(dǎo)其凋亡。
　　 SIRT1是NAD+依賴的組蛋白去乙?；?足進(jìn)化上高度保守的蛋白,SIRT1廣泛分布于組織器官中,通過(guò)調(diào)節(jié)胰島素相關(guān)蛋白之間的相互作用與胰島素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑,