SGK3在肝癌細(xì)胞BEL-7402中的作用及其在去甾體激素培養(yǎng)下增強(qiáng)肝癌細(xì)胞抗凋亡能力的研究.pdf

1、目的：構(gòu)建過(guò)表達(dá)SGK3的pCDH-SGK3質(zhì)粒并將其轉(zhuǎn)染構(gòu)建穩(wěn)定過(guò)表達(dá)的SGK3肝癌細(xì)胞系BEL-7402，SMMC-7721，研究SGK3在肝癌細(xì)胞中對(duì)其下游信號(hào)通路的調(diào)控以及其對(duì)肝癌細(xì)胞在去甾體激素FBS中的抗凋亡能力的影響。
　　方法：（1）使用PCR擴(kuò)增出SGK3基因片段，將產(chǎn)物連接到pCDH載體上，構(gòu)建出pCDH-SGK3的慢病毒質(zhì)粒,將其同空白對(duì)照pCDH-NC分別與慢病毒包裝載體共轉(zhuǎn)入293T細(xì)胞，包裝成慢病毒Le

2、ntivirus-SGK3和Lentivirus-NC。將此慢病毒感染肝癌細(xì)胞BEL-7402、SMMC-7721并用嘌呤霉素篩選，獲得穩(wěn)定過(guò)表達(dá)SGK3細(xì)胞株。（2） Western Blot檢測(cè)SGK3表達(dá)，CCK-8法觀察轉(zhuǎn)染后穩(wěn)定過(guò)表達(dá)SGK3肝癌細(xì)胞及其空白對(duì)照組的生長(zhǎng)情況，以及Western Blot檢測(cè)SGK3在肝癌細(xì)胞中對(duì)下游分子GSK3β、S6的調(diào)控。（3）觀察SGK3在10％FBS以及10%去甾體激素FBS條件下的生

3、長(zhǎng)情況，并使用Western Blot方法檢測(cè)胞內(nèi)C-PARP及pS6的變化，揭示SGK3增強(qiáng)肝癌細(xì)胞BEL-7402在去甾體激素FBS培養(yǎng)下的抗凋亡能力。
　　結(jié)果：（1）成功構(gòu)建出pCDH-SGK3重組慢病毒載體，并將此慢病毒載體及其空白對(duì)照感染至肝癌細(xì)胞系BEL-7402、SMMC-7721中并成功表達(dá)。（2）CCK-8實(shí)驗(yàn)表明穩(wěn)定過(guò)表達(dá)SGK3可促進(jìn)肝癌細(xì)胞的生長(zhǎng)，但卻不能有意義地改變SMMC-7721肝癌細(xì)胞的的生長(zhǎng)，

4、Western Blot檢測(cè)穩(wěn)定過(guò)表達(dá)SGK3的BEL-7402肝癌細(xì)胞及其空白對(duì)照組中GSK3β的磷酸化及不同濃度血清培養(yǎng)下S6的磷酸化變化，闡釋了SGK3在肝癌細(xì)胞中對(duì)其下游信號(hào)通路的影響。（3）肝癌細(xì)胞BEL-7402在去甾體激素血清中生長(zhǎng)受到抑制，Western Blot檢測(cè)到7402細(xì)胞中有雄激素受體的表達(dá)。SGK3在去甾體激素FBS中通過(guò)對(duì)下游分子的調(diào)控增強(qiáng)肝癌細(xì)胞的抗凋亡能力。
　　結(jié)論：（1）在肝癌細(xì)胞BEL-74