成分A008的化學分離及預防肥胖的活性研究.pdf

1、荷葉為睡蓮科植物蓮（Nelumbo nucifera Gaertn.）的干燥葉，具有清熱解暑、升發(fā)清陽、涼血止血之功效。荷葉中含有豐富的黃酮類、生物堿類、有機酸類及揮發(fā)油類成份，其中黃酮類、生物堿類是荷葉現(xiàn)在研究的主要有效部位，其降脂減肥活性倍受人們的關注。 目的：從荷葉中分離成分A008，并考察其對3T3-L1前脂肪細胞增殖與凋亡的影響及對營養(yǎng)型肥胖大鼠體重增長的預防作用。 方法：采用大孔吸附樹脂法獲取荷葉總提取物；回

2、流提取法精制總提取物，在考察提取溶劑種類、提取時間、溶劑用量等單因素的基礎上，采用正交設計法優(yōu)化提取工藝條件；進一步采用硅膠柱層析法、重結晶方法分離純化成分A008。MTT法測定成分A008對3T3-L1前脂肪細胞增殖的影響，AnnexinⅤ-FITC/PI染色法觀察成分A008對其凋亡的影響，流式細胞術定量檢測CyclinD1細胞周期蛋白的表達。建立營養(yǎng)性大鼠肥胖模型，同時灌胃給予成分A008，考察成分A008對營養(yǎng)性肥胖大鼠的體重和

3、體脂指標的影響，同時檢測大鼠主要臟器系數(shù)的大小，考察成分A008預防營養(yǎng)型肥胖大鼠的體重增加的活性，并對其進行毒性評價。 結果：本實驗大孔吸附樹脂法提取荷葉總提取物；得到的洗脫物用25倍量的甲醇回流提取2次，每次2h；得到的提取物用硅膠柱層析法進行分離，用石油醚:乙酸乙酯進行梯度洗脫，在石油醚:乙酸乙酯=8:1時分離得到成分A008；采用甲醇對該組分進行重結晶，純度達到99.99％。本實驗發(fā)現(xiàn)成分A008明顯抑制3T3-L1前脂

4、肪細胞的增殖，且具有濃度依賴性和時間依賴性；同時成分A008 能促進3T3-L1 前脂肪細胞的凋亡，該作用亦具有濃度依賴性。且檢測到成分A008上調CyclinD1蛋白的表達成分A008 高劑量組能夠明顯抑制營養(yǎng)型肥胖大鼠體重的增加，降低其Lee’s指數(shù)及脂肪重量，且對各主要臟器重量沒有明顯毒性作用，說明治療劑量的成分A008能預防營養(yǎng)型肥胖大鼠體重的增加且對大鼠各主要臟器無明顯的毒副作用。 結論：本實驗在以往荷葉荷葉總提取物提

5、取的基礎上加以改進，縮短了實驗周期，簡化了實驗過程，避免了多種毒性較大的有機溶劑的使用，研究了成分A008對3T3-L1前脂肪細胞抑制增殖、促進凋亡的作用，和預防營養(yǎng)型肥胖大鼠體重增加的活性，為成分A008進一步的預防肥胖作用機理的研究和體內藥物代謝的研究提供了可靠的實驗依據(jù)。目前，研制安全、有效、質量可控、作用機理明確的預防和治療肥胖、高脂血癥的藥物是藥物學研究熱點之一，能夠簡便、高效地進行生產是藥物工業(yè)化生產的主要目標。故本實驗又為