中國西南地區(qū)漢族人群BAG3基因單核苷酸多態(tài)性與擴(kuò)張型心肌病的相關(guān)性研究.pdf

1、目的:研究表明20％-35％的擴(kuò)張型心肌病(Dilated Cardiomyopathy, DCM)有明顯的家族遺傳史，目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)的同DCM發(fā)病相關(guān)的基因有30余種，大多數(shù)都是編碼細(xì)胞骨架和肌纖維節(jié)相關(guān)的蛋白質(zhì)，例如TNNT2、DES、MYH7、ACTN2、ACTC、TTN等。近期發(fā)現(xiàn)位于肌小節(jié)的Z盤結(jié)構(gòu)上并在該結(jié)構(gòu)上呈現(xiàn)高表達(dá)水平的Bcl-2相關(guān)抗凋亡蛋白3(Bcl-2 associatedathanogene3，BAG3)的基因變

2、異同DCM相關(guān)。2011年，Villard E首次報道了BAG3基因上的rs2234962多態(tài)位點(diǎn)與DCM導(dǎo)致的心衰有關(guān)，提示BAG3基因可能是導(dǎo)致DCM發(fā)病的候選基因，隨后在日本家族性DCM患者中也發(fā)現(xiàn)BAG3基因突變點(diǎn)Arg218Trp和Leu462Pro以及相關(guān)的多態(tài)點(diǎn)(rs3858339、rs196295、rs117671123、rs78439745、rs3858340)與DCM有關(guān)。但是在中國西南地區(qū)漢族人群中是否也存在BAG

3、3基因的變異，以及其變異是否與DCM發(fā)病相關(guān)，目前尚無相關(guān)研究證實(shí)。故本實(shí)驗(yàn)通過研究BAG3基因的單核苷酸多態(tài)性(single nucleotide polymorphisms，SNPs)與中國西南地區(qū)漢族人群擴(kuò)張型心肌病的相關(guān)性，來探討擴(kuò)張型心肌病的遺傳學(xué)發(fā)病機(jī)制。
　　方法:研究對象選取中國西南地區(qū)的漢族人群，采用病例對照研究，將BAG3基因的4個外顯子作為擴(kuò)增的目的序列。從144例DCM患者(DCM組)和156例健康對照者（

4、對照組）外周血中提取DNA作為擴(kuò)增的模板，設(shè)計引物后采用聚合酶鏈擴(kuò)增反應(yīng)(PCR)擴(kuò)增DCM組和對照組的目的序列，運(yùn)用雙脫氧核糖核酸鏈末端終止測序的方法（Sanger測序法）測定兩組擴(kuò)增產(chǎn)物的堿基序列，分析所得的序列圖，并將測得的堿基序列同數(shù)據(jù)庫中BAG3基因4個外顯子的堿基序列進(jìn)行比對，得出與DCM相關(guān)的SNPs或突變點(diǎn)，再統(tǒng)計出兩組相關(guān)SNPs的基因型和等位基因頻率，用卡方檢驗(yàn)比較DCM組和對照組之間多態(tài)位點(diǎn)的基因型頻率和等位基因頻

5、率的統(tǒng)計學(xué)差異。
　　結(jié)果:
　　1.本研究未在中國西南地區(qū)漢族人群中發(fā)現(xiàn)曾在日本人群中報道過的與DCM發(fā)病相關(guān)的Arg218Trp(c.652C＞T, rs397514506)和Leu462Pro(c.1385T＞C，rs397514507)兩個突變位點(diǎn)，這兩個基因突變分別位于BAG3基因的第3和第4外顯子上，同時也未在該基因上發(fā)現(xiàn)同DCM相關(guān)的其他突變位點(diǎn)。
　　2.在中國西南地區(qū)漢族人群中發(fā)現(xiàn)了6個同DCM相關(guān)的

6、BAG3基因多態(tài)位點(diǎn)，主要位于第3、4外顯子上，而未在第1、2外顯子上發(fā)現(xiàn)相關(guān)的多態(tài)點(diǎn)。發(fā)現(xiàn)的相關(guān)多態(tài)點(diǎn)分別是rs117671123（位于第3外顯子c.772C＞T，Arg258Arg）、rs3858339(位于第4外顯子c.1002T＞G，Pro334Pro)、rs3858340(位于第4外顯子c.1220C＞T，Pro407Leu)、rs196295（位于第4外顯子c.1296A＞G，Va1432Val）、rs374858685(位

7、于第4外顯子c.1299A＞G，Gln433Gln)、rs149358702(位于第4外顯子c.1587C＞T, Ala529Ala)，其中rs117671123、rs196295、rs3858339、rs3858340等位點(diǎn)也在日本人群中報道過。
　　3.發(fā)現(xiàn)位于第4外顯子上的rs196295多態(tài)位點(diǎn)與對照組相比有顯著差異，rs196295多態(tài)位點(diǎn)的AG+GG基因型頻率和G等位基因頻率在DCM組明顯增加，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（分別為

8、75％和51.3％、45.8％和29.5％，均P＜0.05）。此外，DCM組的AG+GG基因型和G等位基因與對照組相比OR值分別為2.85、2.02，即攜帶有AG+GG基因型和G等位基因者發(fā)生DCM的危險性是健康者的2.85、2.02倍。兩組基因型分布均符合Hardy-Weinberg平衡定律(P＞0.05)。
　　4.發(fā)現(xiàn)位于第4外顯子上的rs3858339多態(tài)點(diǎn)的TG基因型頻率及G等位基因頻率與第4外顯子上的rs3858340

9、多態(tài)點(diǎn)的CT基因型頻率及T等位基因頻率相同，在DCM組分別為42.4％、21.2％，在對照組分別為39.7％、19.9％，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。
　　5.發(fā)現(xiàn)位于第3外顯子上的rs117671123多態(tài)點(diǎn)和位于第4外顯子上的rs374858685、rs149358702多態(tài)點(diǎn)在對照組中無基因變異，在DCM組中雖未發(fā)現(xiàn)純合子改變，但發(fā)現(xiàn)有雜合子改變，其中rs117671123多態(tài)點(diǎn)CT基因型頻率為1.4％，rs37485

10、8685多態(tài)位點(diǎn)AG基因型頻率為0.7％，rs149358702多態(tài)位點(diǎn)CT基因型頻率為0.7％;而位于rs117671123上的T等位基因頻率、rs374858685上的G等位基因頻率、rs149358702上的T等位基因頻率分別為0.7％、0.3％、0.3％，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。
　　結(jié)論:
　　1.中國西南地區(qū)漢族人群DCM患者中不存在日本人群中報道的與DCM發(fā)病相關(guān)的突變點(diǎn)Arg218Trp(c.65

11、2C＞T)和Leu462Pro(c.1385T＞C)，該突變點(diǎn)的致病可能同遺傳背景的差異及環(huán)境因素的影響有關(guān)。
　　2.中國西南地區(qū)漢族人群在BAG3基因的4個外顯子上都不存在與DCM相關(guān)的基因突變位點(diǎn)。
　　3.位于BAG3基因第4外顯子上的rs196295單核苷酸多態(tài)性可能與中國西南地區(qū)漢族人群DCM相關(guān)，攜帶有該位點(diǎn)AG+GG基因型和G等位基因者可能使DCM的發(fā)病風(fēng)險增高，這可能是DCM發(fā)生的遺傳易感因素。