CLEC-2與podoplanin在人早孕期母-胎界面的表達(dá)與調(diào)控.pdf

1、妊娠期蛻膜化的子宮內(nèi)膜(蛻膜)和滋養(yǎng)細(xì)胞共同構(gòu)成母-胎界面；來自胚胎的滋養(yǎng)細(xì)胞具有一些類似于惡性腫瘤細(xì)胞的生物學(xué)行為。絨毛內(nèi)層的細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞經(jīng)過分裂、增殖后分化為絨外滋養(yǎng)細(xì)胞,可侵入母體蛻膜深部,并可取代子宮螺旋動脈血管內(nèi)皮細(xì)胞。滋養(yǎng)細(xì)胞侵襲能力對于囊胚植入、胎盤發(fā)育,并建立母-胎循環(huán)至關(guān)重要；滋養(yǎng)細(xì)胞侵襲功能異常,蛻膜螺旋動脈重塑不良是子癇前期、胎兒宮內(nèi)生長遲緩、自然流產(chǎn)等妊娠相關(guān)疾病的主要因為。因此,滋養(yǎng)細(xì)胞的功能調(diào)控一直是生殖醫(yī)學(xué)

2、工作者研究的熱點(diǎn)。胚胎植入過程涉及母-胎界面各功能細(xì)胞間復(fù)雜的分子交互作用。滋養(yǎng)細(xì)胞侵入子宮內(nèi)膜受到自分泌和旁分泌調(diào)節(jié),如各種細(xì)胞因子,妊娠激素的影響。孕期母體內(nèi)存在高水平雌激素(17β-estrodial)、孕激素(progesterone)以及hCG；孕激素和hCG可以上調(diào)滋養(yǎng)細(xì)胞的侵襲力,但其確切分子機(jī)制不詳。CLEC-2是C型凝集素受體超家族“Dectin-1集群”成員之一,分子量為33kDa的Ⅱ型跨膜糖蛋白。CLEC-2起初被

3、認(rèn)為局限表達(dá)于血小板,但最近研究發(fā)現(xiàn),人巨核細(xì)胞以及鼠類外周中性粒細(xì)胞也表達(dá)CLEC-2。RT-PCR分析還證明,PBMC、骨髓細(xì)胞、單核巨噬細(xì)胞,樹突細(xì)胞也有轉(zhuǎn)錄。Rhodocytin和HIV是至今已發(fā)現(xiàn)的CLEC-2的兩個外源性配體。Rhodocytin與CLEC-2的胞外結(jié)構(gòu)域結(jié)合,能夠激活CLEC-2胞漿區(qū)ITAM樣基序,啟動細(xì)胞活化,導(dǎo)致血小板聚集。HIV與CLEC-2相互作用,可促進(jìn)HIV-1感染顆粒的遷移。然而,CLEC-

4、2的主要功能可能是通過識別內(nèi)源配體調(diào)節(jié)內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定。Podoplanin已被鑒定為CLEC-2的內(nèi)源性配體；CLEC-2與podoplanin交互作用促進(jìn)血小板活化和聚集。CLEC-2與podoplanin相互作用還參與腫瘤細(xì)胞的生長和/或轉(zhuǎn)移。迄今為止,還未見凝集素受體CLEC-2在母-胎界面表達(dá)及功能的研究報道。本文對CLEC-2及其內(nèi)源性配體podoplanin在早孕期母-胎界面的表達(dá)進(jìn)行了研究，探討了妊娠相關(guān)激素對CLEC-2表達(dá)

5、的調(diào)節(jié)。本研究分為兩部分：
　　 第一部分：CLEC-2與podoplanin在人早孕期母-胎界面的表達(dá)。
　　 目的：比較分析CLEC-2及及其配體podoplanin在人早孕期和自然流產(chǎn)母-胎界面的表達(dá)。
　　 方法：收集人早孕期正常和自然流產(chǎn)絨毛與蛻膜組織,采用免疫組織化學(xué)、免疫細(xì)胞化學(xué)、Western blot檢測CLEC-2及podoplanin在絨毛、蛻膜組織、原代蛻膜基質(zhì)細(xì)胞、原代滋養(yǎng)細(xì)胞和滋養(yǎng)細(xì)胞

6、系HTR-8/SVneo的表達(dá)。
　　 結(jié)果：在人早孕期正常絨毛與蛻膜組織中,及在原代培養(yǎng)的蛻膜基質(zhì)細(xì)胞、滋養(yǎng)細(xì)胞和HTR-8/SVneo細(xì)胞系均有CLEC-2與podoplanin表達(dá)。自然流產(chǎn)絨毛較正常絨毛明顯低表達(dá)CLEC-2,高表達(dá)podoplanin；而自然流產(chǎn)蛻膜的CLEC-2與podoplanin表達(dá)與正常蛻膜無顯著差異。
　　 結(jié)論：CLEC-2及podoplanin可能參與早孕期母-胎界面的交叉對話。<

7、br>　　 第二部分：CLEC-2在滋養(yǎng)細(xì)胞系HTR-8/SVneo的表達(dá)調(diào)控。
　　 目的：妊娠相關(guān)激素對滋養(yǎng)細(xì)胞系HTR-8/SVneo表達(dá)CLEC-2的調(diào)節(jié)。
　　 方法：應(yīng)用不同濃度雌激素、孕激素、hCG處理HTR-8/SVneo；Western blot分析CLEC-2在HTR-8/SVneo的表達(dá)。
　　 結(jié)果：與對照組相比,hCG上調(diào)滋養(yǎng)細(xì)胞系表達(dá)CLEC-2；相反,雌激素以劑量依賴性方式降調(diào)節(jié)H

8、TR-8/SVneo表達(dá)CLEC-2；孕激素不影響CLEC-2表達(dá)。
　　 結(jié)論：CLEC-2的表達(dá)受到hCG和雌激素雙向調(diào)控,以維持正常妊娠。
　　 綜上所述,在人早孕期母-胎界面表達(dá)CLEC-2與其內(nèi)源配體podoplanin。自然流產(chǎn)絨毛CLEC-2表達(dá)低于正常絨毛,但其配體podoplanin表達(dá)較高。滋養(yǎng)細(xì)胞、DSC及HTR-8/SVneo均表達(dá)CLEC-2及podoplanin；hCG升調(diào)節(jié)、雌激素降調(diào)節(jié)CL