大黃酸對糖尿病大鼠腎臟中神經肽Y及其Y1、Y2受體表達的影響.pdf

1、糖尿病腎病(DN，diabetic nephropathy)是糖尿病(DM，diabetesmellitus)常見的慢性并發(fā)癥之一，在DM患者中約30％會發(fā)生DN。目前，在歐美國家，DN是引發(fā)終末期腎病(ESRD，end stage renal disease)的首要原因。然而糖尿病腎病的發(fā)病機制尚未完全明確，且目前尚無特效的治療方法。糖尿病腎病的發(fā)病因素包括：血糖控制不佳、高血脂、腎臟的血液動力學異常等。大量文獻報道神經肽Y(NPY，

2、neuropeptide Y)及其受體與糖尿病及其并發(fā)癥的發(fā)病密切相關，但糖尿病狀態(tài)下腎臟中NPY及其Y1、Y2受體表達的情況，尚未明了。大黃酸是中藥大黃的主要成分，具有降糖調脂、防治糖尿病腎病等廣泛的藥理作用，但對其機制研究較少。本實驗以鏈脲佐菌素(STZ，streptozotocin)建立糖尿病大鼠模型，探討腎臟中NPY及其Y1、Y2受體表達變化情況，同時觀察大黃酸的治療效果，旨在闡明大黃酸腎臟保護作用的可能機制。
　　第一部

3、分大黃酸對糖尿病大鼠腎臟的保護作用
　　目的：驗證大黃酸對糖尿病大鼠糖脂代謝、腎臟病理變化的影響。
　　方法：8周齡健康雄性Wistar大鼠，體重200-220g(由復旦大學醫(yī)學動物中心提供，清潔級)。在光/暗周期為12h/12h(光照時間7:00-19:00)的條件下飼養(yǎng)于鐵籠中，自由獲得飼料和飲水。大鼠適應性飼養(yǎng)1周后，腹腔內一次性注射65mg/kg鏈脲佐菌素(溶于0.1 mmol/L、PH4.4的枸櫞酸緩沖液)誘導糖尿

4、病模型，正常對照組腹腔內一次性注射等體積的枸櫞酸緩沖液。將糖尿病大鼠隨機分為糖尿病對照組(DM，n=12)和大黃酸治療組(DM-T，n=12)，并以體重量、鼠齡相匹配的正常大鼠作為正常對照組(NC，n=12)。從模型建立后第3天起，每日清晨給予大黃酸治療組大黃酸(100 mg·kg-1·d-1，使用前用0.5％羧甲基纖維素鈉配置成相應濃度的懸液)灌胃，其它兩組用相同體積的溶劑灌胃，共10周。實驗期間，所有大鼠均采用標準飲食，可自由飲水，

5、未使用任何降糖藥物。10周時，留取24h小時尿液測定24h尿蛋白定量，留取血標本及腎臟組織，檢測空腹血糖(FBG，fasting blood glucose)、血脂及24h蛋白尿水平，糖原染(PAS，periodic acid schiff staining)觀察腎臟病理變化。
　　結果：大黃酸可降低糖尿病大鼠血糖、甘油三酯(TG，triglyceride)、總膽固醇(TC，total cholesterol)、24h蛋白尿水平(

6、P<0.01)，緩解糖尿病腎病的病理變化。
　　結論：大黃酸具有改善糖脂代謝紊亂，減輕DN病理變化的作用，這可能是其延緩DN的機制之一。
　　第二部分大黃酸對糖尿病大鼠腎臟中NPY及其Y1、Y2受體表達的影響
　　目的：從分子生物學角度闡明大黃酸治療DN的可能機理。
　　方法：造模、分組、給藥等同第一部分實驗。取血完畢后，迅速取腎、下丘腦，采用放射免疫法、逆轉錄聚合酶鏈式反應、蛋白印跡等方法，觀察各組大鼠下丘腦、

7、腎臟中NPY濃度和腎臟中Y1、Y2受體基因、蛋白表達水平。
　　結果：與正常對照組相比，糖尿病大鼠下丘腦和腎臟中NPY濃度明顯升高(P<0.01)，腎臟中Y1和Y2受體的mRNA和蛋白表達增加(P<0.05)；大黃酸治療后NPY及其Y1、Y2受體表達量顯著低于糖尿病組(P<0.05)。
　　結論：10周糖尿病大老鼠腎臟中NPY及其Y1、Y2受體表達增加。大黃酸對STZ誘導的糖尿病大鼠糖脂代謝紊亂、腎臟病變有一定程度的保護作用