擬南芥AtHVA22d基因在抗旱耐鹽中的作用研究.pdf

1、FunctionalanalysesofArabidopsisAtHVA22dgeneinsaltanddroughtstress‘resistanceThesissubmittedtoeSlSltteclQingdaoAgriculturalUniversityInFulfillmentoftheRequirementfortheDegreeofMasterofScienceChenHaiyan(DepartmentofLifeSci

2、ence)Supervisor：profLiuJiayaoQingdaoChinaJune，2012青島農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文摘要擬南芥AtHVA22d基因在抗旱耐鹽中的作用研究摘要植物的生長發(fā)育過程中面臨多種環(huán)境脅迫，如干旱、高鹽等，植物基因工程技術(shù)是提高植物抗逆性的主要手段之一。當(dāng)植物受到環(huán)境脅迫時或在植物的特定生長階段會發(fā)生自體吞噬途徑，自噬是一個蛋白降解的過程，在這個過程中植物能夠重新吸收利用胞質(zhì)物質(zhì)。植物中自體吞噬的生理功能包括

3、衰老時營養(yǎng)物質(zhì)的重新吸收，饑餓時維持植物生存，參與中央消化液泡的形成等。HVA22是一個ABA和脅迫誘導(dǎo)的基因，最初從大麥中分離得到，在植物扣酵母中HVA22能夠負調(diào)節(jié)細胞的自噬活性。擬南芥中HVA22基因分為HVA22a，b，C，d，e5個家族，其中，HVA22d與ABA、冷、干旱和鹽等因子關(guān)系最為密切。近年來，一些研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)用RNAi的方法組成型干擾自噬相關(guān)基因AtATGl8a以后，在干旱和高鹽脅迫下植物生長不良，表明自體吞噬對于

4、植物抵抗干旱和鹽脅迫方面有一定的作用。本實驗希望通過利用誘導(dǎo)型啟動子RD29A構(gòu)建HVA22d的RNAi載體，使植物在逆境脅迫下能夠通過自噬活性的增強重新吸收利用自身物質(zhì)來抵抗脅迫，同時利用擬南芥HVA22d的突變體及過表達株系研究自噬與植物抗性的關(guān)系。主要研究結(jié)果如下：1AtHVA22d突變體的鑒定根據(jù)相關(guān)資料查找AtHVA22d突變體的TDNA插入位點，以此設(shè)計特異引物進行突變體的鑒定，其中鑒定到了3個突變體純舍株系。2AtHVA2

5、2d啟動子和基因的克隆根據(jù)相關(guān)文獻提供的數(shù)據(jù)，設(shè)計兩對特異引物，然后從擬南芥的eDNA克隆了4珊瑚2嬲的基因并且克隆得到了AtHVA22d的啟動子。3植物表達載體的構(gòu)建我們構(gòu)建了3個植物表達載體：AtHVA22d驅(qū)動GUS的表達載體AtHVA22dProGUS；由組成型啟動子235S驅(qū)動的表達載體p130IS2AtHVA22d；由誘導(dǎo)型啟動子RD29A驅(qū)動的p1301ProRD29AAtHVA22dRNAi表達載體，并導(dǎo)入農(nóng)桿菌EHAl