5-氮雜胞苷和曲古抑菌素A對(duì)HaCaT細(xì)胞MMP-1和MMP-3表達(dá)的影響.pdf

1、背景:光老化指皮膚由于反復(fù)光暴露引起的提前老化，其特征性組織學(xué)變化是彈性組織變性物質(zhì)的沉積和膠原的嗜堿性變性，伴有Ⅰ型和Ⅲ型前膠原的降解。雖然其發(fā)生機(jī)制尚未完全明了，但是基質(zhì)金屬蛋白酶(matrixmetalloproteinases，MMPs)增高導(dǎo)致纖維結(jié)締組織的降解是引起皮膚光老化最重要的機(jī)制。在皮膚光老化的發(fā)生發(fā)展以及當(dāng)前的諸多研究中，認(rèn)為最重要的是基質(zhì)金屬蛋白酶是MMP-1和MMP-3，也是目前的研究熱點(diǎn)。
　　目的:<

2、br>　　(1)探討HaCaT細(xì)胞MMP-1和MMP-3的表達(dá)是否受DNA甲基化的調(diào)控;
　　(2)探討HaCaT細(xì)胞MMP-1和MMP-3的表達(dá)是否受組蛋白乙酰化的調(diào)控;
　　(3)探討HaCaT細(xì)胞MMP-1和MMP-3的表達(dá)是否受DNA甲基化和組蛋白乙?；瘏f(xié)同作用的調(diào)控，為進(jìn)一步研究皮膚光老化的表觀遺傳學(xué)機(jī)制，提供理論依據(jù)。
　　方法:
　　(1)體外常規(guī)培養(yǎng)人角質(zhì)形成細(xì)胞株（HaCaT細(xì)胞）;
　　

3、(2)用5-氮雜胞苷(5-azaC)（1μmol/L）或/和曲古抑菌素A(TSA)(1μmol/L)處理HaCaT細(xì)胞;分為:5-azaC處理組、TSA處理組和5-azaC聯(lián)合TSA處理組，分別作用于HaCaT細(xì)胞0h、24h、48h、72h后提取上清和mRNA;
　　(3)用Real-tinme PCR和ELISA方法分別從mRNA及蛋白的水平檢測(cè)不同藥物處理組HaCaT細(xì)胞中MMP-1/3基因的表達(dá)。
　　結(jié)果:

4、　　(1)用5-azaC(1μmol/L)處理HaCaT細(xì)胞24h、48h、72h后，與0h(空白對(duì)照組)作比較，HaCaT細(xì)胞MMP-1和MMP-3 mRNA水平和蛋白表達(dá)均顯著升高(P＜0.05);
　　(2)用TSA（1μmol/L）處理HaCaT細(xì)胞24h、48h、72h后，與0h(空白對(duì)照組）作比較，HaCaT細(xì)胞MMP-1和MMP-3 mRNA水平和蛋白表達(dá)均顯著升高(P＜0.05);
　　(3)用5-azaC（

5、1μmol/L）聯(lián)合TSA(1μmol/L)處理24h、48h、72h后，與0h(空白對(duì)照組)作比較，HaCaT細(xì)胞MMP-1和MMP-3 mRNA水平和蛋白表達(dá)均顯著升高(P＜0.05);且與單用5-azaC或TSA處理后的不同時(shí)間點(diǎn)比較，24h、48h、72h的HaCaT細(xì)胞MMP-1、MMP-3 mRNA水平和蛋白表達(dá)均較高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　結(jié)論:
　　(1) HaCaT細(xì)胞MMP-1和MMP-