PF4通過TLR4-NF-κB信號途徑上調巨噬細胞MMP-9的表達.pdf

1、研究背景:
　　動脈粥樣硬化(AS)是一種慢性炎癥性病理發(fā)展過程,血管壁的炎癥在動脈粥樣硬化發(fā)病機制中具有重要作用。已有研究證據顯示,早在動脈粥樣硬化病變的初期,血小板作為一種炎性細胞,就參與引起血管內皮活化損傷等反應過程。血小板因子4(PF4)是血小板活化后釋放出的含量最多的蛋白之一,越來越多的研究證據表明,PF4參與動脈粥樣硬化的進程。但由于至今未能確定PF4的特異性細胞表面受體,PF4在動脈粥樣硬化中的具體作用機制還不十分清

2、楚。TLR4是TOLL樣受體家族成員之一,它在動脈粥樣硬化斑塊形成中發(fā)揮重要作用。研究發(fā)現(xiàn),在人粥樣斑塊病變處TLR4存在高表達,并且證實,正是由于TLR4的識別功能,導致一系列與AS有關的細胞因子被合成釋放,其中包括基質金屬蛋白酶9(MMP-9)等。MMP-9在粥樣硬化斑塊處的血管重構、斑塊的不穩(wěn)定性及其破裂誘發(fā)的血管疾病中都起著很重要的作用,提示TLR4信號通路不僅激活動脈粥樣硬化過程中的固有免疫反應,還參與血管重塑過程。本研究以

3、THP-1源性巨噬細胞為觀察對象,探討PF4是否通過TLR4介導的信號途徑來調節(jié)巨噬細胞MMP-9的表達,為血小板活化在動脈粥樣硬化發(fā)生發(fā)展中的作用提供實驗依據。
　　目的:
　　通過觀察PF4對巨噬細胞MMP-9表達影響,研究TLR4/NF-κB信號途徑在PF4調節(jié)巨噬細胞MMP-9表達中的作用,以期探討PF4對動脈粥樣硬化斑塊穩(wěn)定性的可能影響。
　　方法:
　　培養(yǎng)THP-1單核細胞,采用PMA誘導細胞分化為

4、貼壁的巨噬細胞,無血清培養(yǎng)基同步化12小時后開始實驗。
　　1.采用RT-PCR技術檢測THP-1源性巨噬細胞MMP-9和TLR4mRNA的表達情況。
　　2.選擇0 ng/ml、25 ng/ml、50 ng/ml、100 ng/ml、200 ng/ml濃度的PF4處理細胞,RT-PCR技術檢測MMP-9和TLR4mRNA的表達變化,Western Blotting技術檢測MMP-9和TLR4蛋白的表達變化,ELISA技術檢

5、測NF-κB蛋白的表達變化。
　　3.觀察TLR4阻斷劑對PF4誘導THP-1源性巨噬細胞MMP-9表達的影響, RT-PCR和Western Blotting技術分別檢測細胞MMP-9的mRNA和蛋白表達變化, ELISA技術檢測NF-κB蛋白表達變化。
　　4.觀察NF-κB阻斷劑對PF4誘導THP-1源性巨噬細胞MMP-9表達的影響, RT-PCR技術檢測細胞MMP-9mRNA表達變化。
　　結果:
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