Angiopoietin-Tie2系統(tǒng)在體-肺分流肺動脈高壓形成中的變化和作用.pdf

1、第一部分：
　　 Angiopoietin/Tie2系統(tǒng)在大鼠體-肺分流肺動脈高壓形成中的變化和作用
　　 [目的]:血管生成素(Angiopoietin，Ang)是新發(fā)現(xiàn)的一類血管特異性生長因子，是內(nèi)皮特異性的受體酪氨酸激酶Tie2的配體。在肺血管系統(tǒng)尤其是在肺動脈高壓的形成過程中，Ang的作用仍不甚明確。本實驗通過建立大鼠體.肺分流肺動脈高壓模型，檢測大鼠肺組織內(nèi)Ang-1、Ang-2、Ang-3、Tie2和激活型c

2、aspase-3等的變化，了解Ang及其受體Tie2在體-肺分流肺動脈高壓形成過程中的作用。
　　 [方法]:通過套管連接大鼠左頸總動脈和左頸外靜脈建立體-肺分流肺動脈高壓模型。分別于術(shù)后第1周、第2周、第4周、第8周和第12周進(jìn)行大鼠右心室測壓。對肺組織進(jìn)行組織學(xué)分析并測量肺微細(xì)動脈壁厚度指數(shù)。通過免疫組化對肺組織內(nèi)Ang-1、Ang-2、Ang-3和Tie2的表達(dá)進(jìn)行細(xì)胞定位。通過實時定量RT-PCR和Western Blo

3、t的方法，分別檢測Ang-1、Ang-2、Ang-3和Tie2的表達(dá)。同時，通過Western Blot的方法檢測Tie2的磷酸化程度和激活型caspase-3的變化。
　　 [結(jié)果]:與對照組相比，分流組大鼠術(shù)后第1周、第4周、第8周和第12周右心室收縮壓均明顯升高，同時肺微細(xì)動脈厚度指數(shù)也升高。組織學(xué)分析發(fā)現(xiàn)分流4周組大鼠肺微細(xì)動脈內(nèi)膜內(nèi)皮細(xì)胞增生肥大，在分流8周和12周組內(nèi)皮細(xì)胞肥大增生更加明顯。免疫組化發(fā)現(xiàn)Ang-1和A

4、ng-3主要在肺微細(xì)動脈平滑肌細(xì)胞表達(dá)，而Ang-2和Tie2主要在內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)。免疫染色也發(fā)現(xiàn)激活型caspase-3主要出現(xiàn)在肺微細(xì)動脈內(nèi)皮細(xì)胞而不是平滑肌細(xì)胞。在肺動脈高壓形成的過程中，在mRNA和蛋白水平肺組織內(nèi)的Ang-1和Tie2均顯著增加，而Ang-3卻顯著降低。Tie2的磷酸化程度逐漸升高。同時，標(biāo)志細(xì)胞調(diào)亡的激活型caspase-3卻顯著降低。而在mRNA和蛋白水平Ang-2均未發(fā)生明顯的變化。
　　 [結(jié)論]

5、:內(nèi)皮細(xì)胞凋亡減少可能是分流引起的肺動脈高壓形成中一個重要的病理機(jī)制。Ang-1和Tie2的表達(dá)與分流引起的肺動脈高壓緊密相關(guān)。Ang-1/Tie2系統(tǒng)可能通過抑制內(nèi)皮細(xì)胞凋亡，促進(jìn)體-肺分流肺動脈高壓的形成。Ang-3的表達(dá)降低可能促進(jìn)了這一過程。然而在這個過程中Ang-2可能并不起明顯的作用。
　　 第二部分：
　　 Angiopoietin/Tie2系統(tǒng)在體.肺分流先天性心臟病肺動脈高壓形成中的變化和作用
　

6、　 [目的]:Ang-1在肺動脈高壓形成過程中的作用仍存在爭議，而Ang-2和Ang-4在肺動脈高壓形成的過程中的作用所知甚少。本實驗通過對先天性心臟病患者進(jìn)行肺組織活檢，檢測患者肺組織內(nèi)Ang-1、Ang-2、Ang-4、Tie2和激活的caspase-3等的變化，了解Ang及其受體Tie2在先天性心臟病肺動脈高壓形成過程中的作用。
　　 [方法]:24名進(jìn)行心臟手術(shù)的先天性心臟病患者納入本研究?；颊叻譃?組，分別為先天性心

7、臟病不伴有肺動脈高壓組(8例)，先天性心臟病伴輕度肺動脈高壓組(8例)和先天性心臟病伴中重度肺動脈高壓組(6例)。6名因肺大皰行肺葉楔形切除術(shù)的患者為正常對照組。對患者進(jìn)行肺組織活檢，進(jìn)行肺微細(xì)動脈組織形態(tài)分析。通過免疫組化對肺組織內(nèi)Ang-1、Ang-2、Ang-4和Tie2的表達(dá)進(jìn)行細(xì)胞定位。通過實時定量RT-PCR和Western Blot的方法，分別檢測Ang-1、Ang-2、Ang-4和Tie2的表達(dá)。同時，通過Western

8、 Blot的方法檢測Tie2的磷酸化程度和激活型caspase-3的變化。
　　 [結(jié)果]:先天性心臟病伴輕度肺動脈高壓組和先天性心臟病伴中重度肺動脈高壓組患者肺微細(xì)動脈內(nèi)膜內(nèi)皮細(xì)胞肥大增生，肺微細(xì)動脈壁厚度指數(shù)比另外兩組明顯增加。免疫組化發(fā)現(xiàn)Ang-1和ang-4主要在肺微細(xì)動脈平滑肌細(xì)胞表達(dá)，而Ang-2和Tie2主要在內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)。激活型caspase-3主要出現(xiàn)在肺微細(xì)動脈內(nèi)皮細(xì)胞。實時定量RT-PCR和Western

9、Blot分析顯示，與先天性心臟病不伴有肺動脈高壓組和對照組相比，先天性心臟病伴輕度肺動脈高壓組和先天性心臟病伴中重度肺動脈高壓組Ang-1、Ang-4和Tie2的表達(dá)逐漸升高。肺動脈高壓患者肺組織內(nèi)Tie2的磷酸化也逐漸增加。但肺組織內(nèi)激活型caspase-3卻明顯降低。
　　 [結(jié)論]:內(nèi)皮細(xì)胞凋亡減少可能是先天性性臟病引起的肺動脈高壓形成中一個重要的病理機(jī)制。Ang-1和Tie2的表達(dá)與分流引起的肺動脈高壓緊密相關(guān)。Ang-